Tinciones hematológicas

Para definir correctamente lo que son las tinciones hematológicas, es preciso conocer el significado del término tinción:

Del lat. tinctio, -ōnis.
1. f. Acción y efecto de teñir.

Si buscamos la definición de teñir encontramos:

Del lat. tingĕre.
Conjug. c. ceñir.
1. tr. Dar cierto color a una cosa, encima del que tenía. U. t. c. prnl.
2. tr. Dar a algo un carácter o apariencia que no es el suyo propio, o que lo altera.

Definiendo las tinciones hematológicas

Las tinciones hematológicas se pueden definir como el conjunto de técnicas necesarias para teñir y diferenciar los distintos componentes celulares de la sangre. Estos componentes conforman la fracción forme de la sangre, y gracias a las tinciones se pueden diferenciar en un microscopio óptico.

Las técnicas en que se basan las tinciones hematológicas hacen uso de colorantes. Éstos interactúan con los componentes celulares dispuestos a modo de frotis sanguíneo sobre un portaobjetos. Los colorantes son sustancias capaces de fijarse selectivamente según su afinidad química.

Colorantes

En el apartado anterior definíamos los colorantes como sustancias capaces de fijarse según su afinidad química. Los colorantes básicos se fijan en las estructuras ácidas formando sales insolubles coloreadas. Del mismo modo, los colorantes ácidos hacen lo mismo con las estructuras básicas.

Los colorantes se pueden clasificar según su origen o según su naturaleza química. Si atendemos a su origen tenemos la siguiente clasificación:

  • Naturales: Los colorantes naturales se subdividen, a su vez, en orgánicos e inorgánicos. Los orgánicos se subdividen, también, según su naturaleza animal o vegetal.
  • Artificiales: También denominados colorantes sintéticos. Adquieren la clasificación que se le atribuye a los colorantes tradicionales, conformados por colorantes ácidos, básicos, neutros e indifirentes.

Según su naturaleza química tenemos los siguientes colorantes, que serán definidos en el siguiente apartado:

  • Ácidos.
  • Básicos.
  • Neutros.

Colorantes tradicionales

Las tinciones tradicionales se realizan mediante el uso de colorantes que, con frecuencia, derivan de la anilina. Estos colorantes se clasifican en cuatro grupos:

  • Colorantes ácidos: Tienen especial afinidad por las estructuras básicas de las células, como por ejemplo la hemoglobina. Algunos ejemplos son la eosina y el ácido pícrico.
  • Colorantes básicos: Tienen especial afinidad por las estructuras ácidas de las células, como por ejemplo los ácidos nucleicos. Algunos ejemplos son el azul de metileno, el azul de toluidina o la hematoxilina.
  • Colorantes neutros: Están compuestos por sales de un ácido y de una base coloreados. Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro. Un ejemplo es el eosinato de azul de metileno.
  • Colorantes indiferentes: No tienen especial afinidad por estructuras ácidas o básicas. Además, presentan insolubilidad al agua. Un ejemplo es el Sudán III.

Tipos de tinciones hematológicas

Las tinciones hematológicas se pueden clasificar según la vitalidad de las células que se quieren teñir:

  • Vitales: Las tinciones vitales son tinciones hematológicas que se realizan sobre células vivas, manteniéndolas en dicho estado. La técnica se basa en la introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo. El verde Jano, las sales de tetrazolio o el azul de metileno son ejemplos de colorantes vitales.
  • Supravitales: Las tinciones supravitales son idénticas a las vitales, con la diferencia de que la técnica se realiza sobre células o tejidos vivos que están aislados del organismo del que proceden. Los colorantes vitales se usan tanto para técnicas vitales como para supravitales.
  • No vitales: Las tinciones no vitales son tinciones hematológicas que se realizan sobre células muertas. Estas técnicas requieren un paso previo, que es la fijación de dichas células al portaobjetos haciendo uso de calor, etanol o metanol, con la particularidad de mantener inalteradas las estructuras de los diferentes componentes celulares.

También se pueden clasificar según la finalidad de uso:

  • Tinciones tradicionales: Hacen uso de colorantes para determinar la naturaleza de la célula teñida y su identificación. Son las llamadas tinciones panópticas que hacen uso de colorantes tipo Romanowsky.
  • Tinciones especiales: Hacen uso de colorantes para determinar la existencia y localización de diversas sustancias químicas en los componentes celulares sanguíneos. Un tipo de estas técnicas son las denominadas tinciones citoquímicas. Otra técnica especial, con la misma finalidad que las tinciones citoquímicas, son las tinciones fluorescentes, cuyos colorantes son fluorocromos. Estas técnicas especiales serán abordadas en futuras entradas.

Tinciones hematológicas tradicionales

Las tinciones hematológicas tradicionales, o clásicas, se siguen empleando en la actualidad. Están basadas en la técnica desarrollada por Dimitri Romanowsky, quien ideó la combinación de colorantes básicos y ácidos para obtener una amplia gama de colores en las células sanguíneas.

Un colorante tipo Romanowsky está basado en el uso de una mezcla formada por un colorante ácido (eosina) y uno o varios colorantes básicos (azul de metileno, azur A, azur B y azur C). Las tinciones que se realizan con este tipo de colorante se denominan tinciones panópticas o tinciones tipo Romanowsky.

Dentro de las tinciones tipo Romanowsky encontramos:

  • Tinción de Giemsa.
  • Tinción de May-Grünwald-Giemsa. También llamado Panóptico de Pappenheim.
  • Tinción de May-Grünwald.
  • Tinción de Wright.

tinciones hematológicasTinciones tipo Romanowsky

A esta lista de tinciones habría que añadir una tinción diferencial que es una modificación de la técnica de Romanowsky, motivo por el que no se le suele catalogar como tinción tipo Romanowsky:

  • Panóptico rápido.

Todas estas tinciones se pueden realizar con técnicas de inundación-decantación o por inmersión. En las primeras los reactivos se echan directamente sobre la preparación. Posteriormente se decantan los reactivos inclinando el portaobjetos para que los líquidos caigan. En cambio, en las técnicas de inmersión, las preparaciones se sumergen en recipientes donde se encuentran los reactivos. Los portaobjetos, con sus extensiones sanguíneas, se sumergen en cubetas haciendo uso de cestillos especialmente preparados para albergar las preparaciones.

tinciones hematológicasInundación-decantación

Existen teñidores automáticos que facilitan estas labores, ahorrando tiempo y evitando defectos en las tinciones. Estos aparatos pueden ser específicos para panópticos rápidos o pueden ser multitarea, siendo aptos para realizar más tinciones además de las tinciones hematológicas.

Defectos en las tinciones hematológicas

La calidad de una tinción depende de una serie de cuestiones:

  • Tipo de colorante empleado.
  • Calidad del colorante.
  • Características del colorante.
  • Método de tinción empleado.

Los defectos más frecuentes que nos podemos encontrar en las tinciones hematológicas, y sus posibles causas, son:

  • Colores muy rosados/coloración muy acidófila.
    • pH del colorante muy ácido.
    • Tiempo de exposición del colorante insuficiente.
    • Lavado excesivo de la preparación después de la tinción.
  • Colores muy azules/coloración muy basófila.
    • pH del colorante muy básico.
    • Frotis sanguíneo grueso.
    • Tiempo de exposición del colorante excesiva.
    • Lavado insuficiente de la preparación después de la tinción.
    • Puede ocurrir cuando la tinción se realiza sobre un frotis con una antigüedad superior a 24 horas.
  • Aparición de artefactos y precipitados.
    • Uso de portaobjetos sucios.
    • Uso de colorantes sin filtrar.
    • Secado del colorante durante la tinción, antes del lavado.
    • Tinción excesivamente prolongada en el tiempo.
    • Lavado insuficiente de la preparación después de la tinción.

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