Tinciones citoquímicas

Tinciones citoquímicas

Las tinciones citoquímicas también son denominadas técnicas citoquímicas o métodos citoquímicos. Son técnicas que determinan la existencia y localización de distintos compuestos químicos en las células.

Los compuestos químicos se ponen de manifiesto al teñirse y visualizarse al microscopio óptico. La tinción resulta de la reacción química producida entre el compuesto químico buscado y el reactivo utilizado en la técnica.

A lo largo de esta entrada se van a tratar las tinciones citoquímicas que se usan especificamente en hematología.

Tinciones citoquímicas

Las tinciones citoquímicas son diferentes a las tinciones hematológicas. Las primeras ponen de manifiesto compuestos químicas específicos de las células hemáticas. En cambio, las segundas ponen de manifiesto, de forma genérica, las células hemáticas y sus componentes principales (núcleo, citoplasma y granulación).

Los compuestos químicos celulares que se pueden determinar mediante las técnicas citoquímicas son:

  • Principios inmediatos.
  • Enzimas.
  • Ácidos nucleicos.
  • Compuestos inorgánicos.

Determinación de principios inmediatos mediante tinciones citoquímicas

Mediante técnicas citoquímica se pueden poner de manifiesto:

  • Hidratos de carbono: La presencia de glúcidos se pone de manifiesto mediante la tinción de PAS, también denominada técnica de Schiff o técnica del ácido peryódico. El ácido peryódico oxida a los grupos hidroxilo de dos carbonos cercanos, formando grupos aldehídos. De este modo el reactivo de Schiff puede reaccionar con ellos produciendo un color rojo intenso, revelando así la presencia de hidratos de carbono.
  • Lípidos: Este principio inmediato puede ser puesto de manifiesto utilizando diversas tinciones. Si usamos como colorante el Sudan III, los lípidos serán teñidos de rojo anaranjado. En cambio, el colorante Sudan IV los tiñe de un color rojo pardo. También existen otros colorantes que manifiestan la presencia de lípidos, como el rojo al aceite o el Negro Sudan B.
  • Proteínas: Las proteínas se pueden poner de manifiesto con la reacción de Millon. El reactivo utilizado es el nitrato de mercurio, que reacciona con aminoácidos aromáticos de las proteínas. Éstos incluyen en su cadena un derivado del grupo fenilo. Feninalalina y tirosina son dos ejemplos de aminoácidos aromáticos que se teñirían de color rojo al entrar en contacto con el nitrato de mercurio.

tinciones citoquímicasFrotis sanguíneo teñido con Negro Sudan B

Determinación de enzimas mediante tinciones citoquímicas

Las técnicas citoquímicas nos permiten determinar la existencia de dos clases de enzimas:

  • Oxidantes.
  • Hidrolíticas.

Determinación de enzimas oxidantes

La técnica de la mieloperoxidasa es una tinción citoquímica que pone de manifiesto la enzima a la que debe su nombre. Se pone de manifiesto como un precipitado amarillo ocre al reaccionar con la bencidina en presencia de peróxido de hidrógeno (H2O2).

La mieloperoxidasa se encuentra en el citoplasma de todos los leucocitos, en cantidad variable, excepto en los linfocitos. Esta tinción la llevan a cabo contadores automáticos y autoanalizadores, distinguiendo seis poblaciones.

Las células LUC incluyen linfocitos grandes activados y células de anormal presencia en sangre periférica, como células plasmáticas o linfoblastos. Estas células deben tener un recuento por debajo del 4%. Con todos los datos poblacionales, incluído el de células LUC, el autoanalizador realiza el índice MPXI, también llamado índice de actividad peroxidásica media.

Si el índice está fuera de los valores normales de referencia, nos indicará una posible patología en la serie mieloide.

Determinación de enzimas hidrolíticas

Se determinan enzimas como la fosfatasa ácida, fosfatasa alcalina y esterasas.

Fosfatasa ácida

La fosfatasa ácida es una enzima hidrolítica que actúa hidrolizando ésteres del ácido fosfórico. Actúa a un pH de 5, de ahí su nombre, y produce un precipitado rojo anaranjado al combinarse con una sal diazoica, que reacciona con los productos intermedios de la reacción enzimática.

En condiciones normales la mayoría de las células hemáticas son positivas para esta enzima. Debido a ello, su utilidad es limitada. Se emplea, sobre todo, para el diagnóstico de la tricoleucemia, también llamada leucemia de las células peludas, porque los tricoleucocitos presentan una intensa actividad fosfatasa ácida. Se emplea también para positivar células del plasmocitoma (tumor de células plasmáticas).

Fosfatasa alcalina

La fosfatasa alcalina es una enzima hidrolítica que actúa hidrolizando ésteres del ácido fosfórico. Actúa a un pH de 9-9.5, y se pone de manifiesto cuando una sal diazódica se combina con un producto de la hidrólisis (alfa-naftol-fosfato), produciendo un precipitado de color pardo.

Esta enzima se encuentra en gránulos secundarios de los neutrófilos. Dependiendo de la cantidad de precipitado en su citoplasma se clasifican las células en seis grados diferentes. Se valora nada más en neutrófilos cayados y segmentados, presentes en sangre periférica. La valoración se establece teniendo en cuenta la aparición de precipitado pardo-marrón en el citoplasma.

Tinción de Esterasas

Las esterasas son enzimas que hidrolizan los ésteres de cadena corta de los ácidos grasos. Existen muchas de ellas y se diferencian por el tipo de sustrato sobre el que actúan y el pH al que lo hacen.

Pueden ser inespecíficas cuando el sustrato es simple o específicas si el sustrato es complejo. Las inespecíficas identifican con certeza a monocitos, monoblastos y promonocitos. Las específicas se muestran positivas en monocitos, histiocitos, megacariocitos y plaquetas.

Determinación de ácidos nucleicos mediante tinciones citoquímicas

La tinción de Feulgen pone de manifiesto la presencia de ADN en las células hemáticas. Se provoca una hidrólisis ácida sobre el ADN que deja libres grupos aldehídos en las pentosas. Aplicando el reactivo de Schiff, usado también para manifestar hidratos de carbono, los grupos aldehídos reaccionan con él creando un color rojo.

Si esta tinción se combina con el uso del verde de metilo-pironina, se pondrá de manifiesto tanto la presencia de ADN como la de ARN. Además, la doble tinción ocurrirá de forma simultánea.

Determinación de compuestos inorgánicos mediante tinciones citoquímicas

La tinción de Perls detecta los depósitos de hierro del interior de la célula. Estos depósitos se encuentra en forma de gránulos de hemosiderina. En la técnica, el HCl libera iones férricos de las moléculas de hemosiderina, que reaccionan con ferrocianuro potásico produciendo un precipitado azul verdoso de ferricianuro férrico.

tinciones citoquímicasTinción de Perls

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