Tinción negativa de cápsulas

La tinción negativa de cápsulas es una práctica que realicé en la asignatura de microbiología, durante el segundo curso del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Tinción negativa de cápsulas

Título

Tinción negativa de cápsulas.

Objetivo

Realizar una tinción negativa de cápsulas para observar, precisamente, las cápsulas de una levadura.

Fundamento

La tinción negativa de cápsulas es una tinción estructural, ya que pone de manifiesto las cápsulas y no tiñe los microorganismos. Tiñe el fondo de color negruzco y permite ver los microorganismos sin colorear sobre dicho fondo. De este modo genera el contraste suficiente como para permitir su visualización al microscopio.

Para esta tinción se pueden utilizar dos colorantes diferentes: nigrosina o tinta china. En la práctica se utilizará la primera de ellas.

La nigrosina es un colorante aniónico de color negro que es repelido por las cápsulas, lo que imposibilita su penetración dentro de los microorganismos. Permite la visualización de cápsulas bacterianas y fúngicas.

Material y Reactivos

  • Placa de petri sembrada con la levadura sobre el medio de cultivo agar-sangre.
  • Asa de siembra de platino.
  • Portaobjetos.
  • Papel de filtro.
  • Mechero Bunsen conectado a una toma centralizada de gas.
  • Microscopio óptico de campo brillante.
  • Nigrosina al 1% previamente reconstituída.

Técnica

  1. Tomar una pequeña muestra del microorganismo sembrado en el medio de cultivo (levadura) y colocarlo en el centro del portaobjetos.
  2. Añadir al portaobjetos una gota de nigrosina o de tinta china.
  3. Mezclar con el asa de siembra estéril y realizar una extensión.
  4. Dejar secar la extensión a temperatura ambiente.
  5. Observar la preparación en el microscopio óptico.

Resultados

Tinción negativa de cápsulas

tinción negativa

En las preparaciones pudimos apreciar que había demasiada carga de levaduras. Además, había apariencia de una cápsula compartida entre las levaduras. Esa apariencia es muy probable que sea debida a la alta carga de la extensión.

En una preparación posterior, con menor carga de microorganismos, pudimos observar levaduras sueltas. Incluso pudimos apreciar algunas en estado de gemación.

Observaciones

En la primera extensión, correspondiente a la primera imagen, la preparación tenía mucha muestra. También se echó poco colorante, de ahí la diferencia de contraste entre una imagen y otra.

En la segunda extensión la gota de nigrosina fue más grande, y la impronta del microorganismo sobre el portaobjetos más pequeña. De este modo pudimos obtener una preparación de mayor calidad, en la que pudimos apreciar, incluso, levaduras en estado de gemación.

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