Tinción de reticulocitos

Tinción de reticulocitos

La práctica titulada Tinción de reticulocitos fue la última que realicé durante el primer trimestre en la asignatura de hematología.

Tinción de reticulocitos

Título

Tinción de reticulocitos

Objetivos

  • Aprender a realizar la tinción de reticulocitos.
  • Realizar un recuento de reticulocitos.

Fundamento

Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros presentes en sangre periférica, lugar donde terminan su maduración a hematíes. Contienen restos de ARN y ribosomas que precipitan en presencia de los coloranes vitales como el azul de metileno o el azul de cresil brillante.

En los reticulocitos incubados con el colorante se ven imágenes gránulo-filamentosas identificables con el microscopio óptico, que corresponden a los restos de ARN.

El recuento de reticulocitos puede realizarse mediante método manual o por citometría de flujo. En el caso que nos ocupa realizaremos el recuento manual. Y para ello utilizaremos el colorante azul de cresil brillante.

Los valores normales de reticulocitos se sitúan entre el 0.5% y el 2% del total de hematíes presentes en la sangre. La cifra obtenida permite catalogar una anemia como regenerativa o arregenerativa. Se trata de un parámetro útil para comprobar la respuesta del organismo al tratamiento de algunas anemias.

Un valor superior al 2% implica la existencia de una reticulocitosis. Podemos encontrarnos este valor en hemorragias, anemias carenciales tratadas y hemólisis. Por el contrario, un valor inferior al 0.5% implica la existencia de una reticulopenia. Podemos encontrar un valor de estas características en aplasias medulares y en déficits de factores de maduración de los hematíes (hierro, vitamina B12 y ácido fólico).

Tinción de reticulocitos

Material

  • Sangre anticoagulada con EDTA o, en su defecto, sangre capilar.
  • Tubo de ensayo o tubo de hemólisis.
  • Parafilm.
  • Portaobjetos.
  • Portaobjetos esmerilado.
  • Pipetas pasteur.
  • Colorante azul de cresil brillante (1 gramo de azul de cresil brillante y 100 ml de NaCl al 0.85%).
  • Aceite de inmersión.
  • Microscopio.
  • En caso de punción capilar hará falta guatis, alcohol de 70º y el contenedor de residuos biológicos.

Técnica

  1. En un tubo de hemólisis debidamente rotulado, se mezclan tres gotas de sangre con tres gotas de colorante.
  2. Mezclar suavemente, para evitar la hemólisis de los hematíes.
  3. Dejar en reposo durante 15 minutos a temperatura ambiente.
  4. Homogeneizar la mezcla.
  5. Realizar una fina extensión sanguínea.
  6. Rotular el portaobjetos.
  7. Dejar secar al aire.
  8. Realizar el recuento de reticulocitos utilizando el objetivo de inmersión del microscopio óptico.

Resultados

Tinción de reticulocitos

En esta imagen podemos apreciar parte del material necesario para el correcto desarrollo de la técnica.

Tinción de reticulocitos

Aquí podemos apreciar a un compañero depositando tres gotas de sangre capilar, previa punción.

Tinción de reticulocitos

Mezcla de sangre con el colorante azul de cresil brillante. Imagen captada durante el reposo de 15 minutos a temperatura ambiente.

Tinción de reticulocitos

En esta imagen vemos parte del material utilizado después del tiempo de reposo y de la creación de las extensiones sanguíneas.

Tinción de reticulocitos

Imagen captada tras la realización de la extensión con la mezcla de sangre y colorante.

Tinción de reticulocitos

En esta imagen podemos observar claramente un reticulocito. El campo observado está observado con el objetivo de inmersión de 100X (1000X de resolución). La imagen está aumentada utilizando el zoom óptico de la cámara con la que se tomó la imagen.

Tinción de reticulocitos

Dos reticulocitos observados al microscopio óptico con el objetivo de inmersión (1000X de resolución). Esta imagen está ampliada digitalmente.

Tinción de reticulocitos

Se observaron dos campos, contando todos los hematíes presentes en él. En total se contabilizaron 490 hematíes, de los cuales 8 fueron identificados como reticulocitos.

Con los datos obtenidos solo faltaba calcular el porcentaje:

Tinción de reticulocitos

Interpretación de los resultados

Los resultados son absolutamente normales. Otros compañeros realizaron el mismo recuento sobre la misma muestra sanguínea. La sangre procedía de una muestra de sangre anticoagulada con EDTA. Los resultados que obtuvieron mis compañeros oscilaban entre el 1% y el 1.9%, sin salirse de los valores normales.

Un valor superior al 2% implica la existencia de una reticulocitosis tipica de una anemia regenerativa. Podemos encontrarnos este valor en hemorragias, anemias carenciales tratadas y hemólisis. Por el contrario, un valor inferior al 0.5% implica la existencia de una reticulopenia típica de una anemia arregenerativa. Podemos encontrar un valor de estas características en aplasias medulares y en déficits de factores de maduración de los hematíes (hierro, vitamina B12 y ácido fólico).

Observaciones

El resultado será más fiable cuanto mayor sea el número de células contadas haciendo uso del método manual.

Una reticulocitosis puede manifestarse en situaciones no patológicas. Por ejemplo tras una donación de sangre o tras una hemólisis acaecida tras un ejercicio físico muy intenso.

También existen fármacos que pueden inducir la aparición de una reticulocitosis, como el ácido acetilsalicílico o la penicilina, y la aparición de una reticulopenia, como el cloranfenicol y el metrotexato.

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