Tinción de May-Grünwald

La Tinción de May-Grünwald es una de las primeras práctica que se realiza en la asignatura de hematología, durante el primer curso de los estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Tinción de May-Grünwald

Objetivo

Realizar una tinción de May-Grünwald sobre una extensión sanguínea.

Fundamento

Las tinciones hematológicas se pueden definir como el conjunto de técnicas necesarias para teñir y diferenciar los distintos componentes celulares de la sangre. Estos componentes conforman la fracción forme de la sangre, y gracias a las tinciones se pueden diferenciar en un microscopio óptico.

Las técnicas en que se basan las tinciones hematológicas hacen uso de colorantes. Éstos interactúan con los componentes celulares dispuestos a modo de frotis sanguíneo sobre un portaobjetos. Los colorantes son sustancias capaces de fijarse selectivamente según su afinidad química.

Un colorante tipo Romanowsky está basado en el uso de una mezcla formada por un colorante ácido (eosina) y uno o varios colorantes básicos (azul de metileno, azur A, azur B y azur C). Las tinciones que se realizan con este tipo de colorante se denominan tinciones panópticas o tinciones tipo Romanowsky.

Tinción de May-Grünwald

La tinción de May-Grünwald, al igual que la tinción de Giemsa o la Tinción de Wright, está catalogada como tinción tipo Romanowsky. Del mismo modo que su colorante, que da nombre a la tinción, está catalogado también como colorante tipo Romanowsky.

El colorante de May-Grünwald es una solución en metanol de un colorante ácido (eosina) y un colorante básico (azul de metileno). Estos colorantes teñirán las estructuras celulares dependiendo de su carácter ácido o básico.

Material

  • Frotis sanguíneo seco y rotulado
  • Cubeta de tinción
  • Varillas paralelas
  • Frasco lavador
  • Pipetas pasteur
  • Cronómetro

Reactivos

  • Agua destilada
  • Colorante de May-Grünwald

Técnica

  1. Llenar de agua la cubeta para que los colorantes no se peguen al fondo.
  2. Colocar las varillas paralelas sobre los bordes de la cubeta.
  3. Colocar las extensiones sanguíneas sobre las varillas paralelas.
  4. Cubrir la extensión con un volumen conocido de solución extemporánea de May-Grünwald y dejar actuar durante 3 minutos. En este paso se produce la fijación de la extensión gracias al metanol que contiene el colorante.
  5. Añadir el mismo volumen conocido de agua destilada y soplar ligeramente con la pipeta para lograr una mezcla homogénea. Dejar actuar la mezcla de colorante y agua destilada durante 8-10 minutos.
  6. Lavar la extensión sanguínea con agua destilada hasta eliminar todos los restos de colorante.
  7. Secar las extensiones al aire, colocadas en vertical.
  8. Observar los frotis sanguíneos teñidos al microscopio óptico.

Resultado

El resultado fue similar al obtenido en la tinción de Giemsa, donde los citoplasmas de los leucocitos no se tiñeron y la coloración salió más acidófila de lo normal. Al igual que en el resto de tinciones, los colorantes fueron filtrados previamente y se cumplieron los tiempos a rajatabla. Una posible explicación a los resultados mediocres es el mal estado de los colorantes debido a una posible variación en el pH de los mismos.

Tinción de May-Grünwald
Tinción de May-Grünwald vista al microscopio óptico a una resolución de 400X (objetivo de 40X).

Observaciones

Esta práctica se realizó paralelamente a otras tinciones tipo Romanowsky. Otros grupos se encargaron de hacer las tinciones de Giemsa, May-Grünwald-Giemsa y Wright. El mejor resultado se obtuvo con la tinción de Wright.

Los núcleos de los neutrófilos se mostraron picnóticos en las tinciones de los grupos que optaron por el uso de una sangre con cierta vejez. Esta sangre había sido extraída días antes de la práctica y fue conservada a 4ºC.

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