Tinción de May-Grünwald-Giemsa

La Tinción de May-Grünwald-Giemsa es una de las primeras prácticas que se realiza en la asignatura de hematología, durante el primer curso de los estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Tinción de May-Grünwald-Giemsa

Objetivo

Realizar una tinción de May-Grünwald-Giemsa sobre una extensión sanguínea.

Fundamento

Las tinciones hematológicas se pueden definir como el conjunto de técnicas necesarias para teñir y diferenciar los distintos componentes celulares de la sangre. Estos componentes conforman la fracción forme de la sangre, y gracias a las tinciones se pueden diferenciar en un microscopio óptico.

Las técnicas en que se basan las tinciones hematológicas hacen uso de colorantes. Éstos interactúan con los componentes celulares dispuestos a modo de frotis sanguíneo sobre un portaobjetos. Los colorantes son sustancias capaces de fijarse selectivamente según su afinidad química.

Un colorante tipo Romanowsky está basado en el uso de una mezcla formada por un colorante ácido (eosina) y uno o varios colorantes básicos (azul de metileno, azur A, azur B y azur C). Las tinciones que se realizan con este tipo de colorante se denominan tinciones panópticas o tinciones tipo Romanowsky.

Tinción de May-Grünwald-Giemsa

La tinción de May-Grünwald-Giemsa, también denominada panóptico de Pappenheim, al igual que la tinción de Giemsa, la tinción de May-Grünwald o la tinción de Wright, está catalogada como tinción tipo Romanowsky. Del mismo modo que su colorante, que da nombre a la tinción, está catalogado también como colorante tipo Romanowsky.

Algunos autores la catalogan como la tinción más utilizada debido a la calidad de su resultado, ya que cuenta con una resolución superior al resto de tinciones. Si bien es cierto, que la tinción de panóptico rápido es la preferida en algunos laboratorios como el de urgencias.

Material

  • Frotis sanguíneo seco y rotulado
  • Cubeta de tinción
  • Varillas paralelas
  • Frasco lavador
  • Pipetas pasteur
  • Cronómetro
  • Microscopio óptico

Reactivos

  • Agua destilada
  • Colorante de May-Grünwald
  • Colorante de Giemsa

Técnica

  1. Llenar de agua la cubeta de tinción para que los colorantes no se peguen al fondo.
  2. Colocar las varillas paralelas sobre los bordes de la cubeta.
  3. Colocar las extensiones sanguíneas sobre las varillas paralelas.
  4. Cubrir la extensión con un volumen conocido de solución extemporánea de May-Grünwald y dejar actuar durante 2 minutos. En este paso se produce la fijación de la extensión gracias al metanol que contiene el colorante.
  5. Añadir el mismo volumen conocido de agua destilada y soplar ligeramente con la pipeta para lograr una mezcla homogénea. Dejar actuar la mezcla de colorante y agua destilada durante 2-3 minutos.
  6. Decantar el colorante de May-Grünwald.
  7. Cubrir las extensiones con solución extemporánea de Giemsa recién diluída a 1/10 (1 gota de Giemsa por 9 gotas de agua destilada) y dejar actuar durante 20 minutos.
  8. Lavar las extensiones con agua destilada para eliminar los restos de colorante.
  9. Secar las extensiones al aire, colocadas en vertical.
  10. Observar los frotis sanguíneos teñidos al microscopio óptico.

Resultado

Tinción de May-Grünwald-Giemsa
Campo del microscopio óptico en extensión teñida con May-Grünwald-Giemsa (Resolución 400X).

Las tinciones de Giemsa y de May-Grünwald dieron problemas por separado, por lo que era de esperar que la tinción de May-Grünwald-Giemsa reprodujera, al menos, parte de los mismos. El resultado fue aún peor, lo que reforzó la idea de que los colorantes no estaban en buen estado.

Se filtraron los colorantes con mimo, se respetaron los tiempos a rajatabla y todos los grupos tuvieron los mismos problemas.

Observaciones

Por necesidad se utilizó agua desionizada en lugar de agua destilada.

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