Tinción de esporas mediante técnica de Wirtz

La Tinción de esporas mediante técnica de Wirtz es una práctica que realicé en la asignatura de microbiología clínica. Durante el transcurso del segundo ciclo del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Tinción de esporas mediante técnica de Wirtz

Título

Tinción de esporas mediante técnica de Wirtz.

Objetivo

Visualizar las formas de resistencia de los microorganismos, haciendo uso de la tinción de esporas mediante técnica de Wirtz.

Fundamento

Debido a la composición de las esporas, éstas se tiñen con algunos colorantes. Las esporas, ya sean exosporas o endosporas, son una forma de resistencia de los microorganismos. Los géneros Clostridium y Bacillus son los más destacados entre las bacterias que producen estas formas de resistencia.

Se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables, formándose una espora por cada forma vegetativa bacteriana. Una vez finalizado el proceso de esporogénesis, la bacteria se lisa liberando la espora al exterior. Cuando las condiciones ambientales vuelven a ser favorables, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinación que posee la espora perdura durante años.

No son fáciles de teñir debido a sus múltiples cubiertas impermeables, motivo por el que la coloración se fuerza con calor y poniendo papel de filtro con colorante. Se utiliza safranina como contraste para poder visualizar mejor el microorganismo y sus esporas.

Material

  • Cubeta.
  • Trípode.
  • Barras de tinción.
  • Mechero Bunssen.
  • Pinzas metálicas.
  • Pinzas de madera.
  • Portaobjetos.
  • Papel de filtro.
  • Asa de siembra.
  • Microscopio óptico.
  • Placa de petri sembrada con microorganismo en agar sangre.
  • Matraz aforado de 100 ml.

Reactivos

  • Agua destilada.
  • Safranina.
  • Verde malaquita al 0.25% en solución hidroalcohólica. Es decir, 0.25 gramos de malaquita disueltos en 10 ml de etanol de 96º, y enrasado hasta 100 ml en un matra con agua destilada.

Técnica

  1. Preparar el frotis bacteriano que se va a teñir.
  2. Colocar un trozo de papel de filtro, del tamaño de la extensión, encima de ella.
  3. Añadir el colorante verde malaquita para que cubra bien la extensión.
  4. Pasar la preparación por encima de la llama del mechero bunssen para fijar el colorante, durante cinco minutos.
  5. Retirar el papel de filtro y lavar con agua destilada para eliminar el exceso de colorante.
  6. Teñir la preparación con safranina, para el contraste, durante un minuto.
  7. Lavar el agua destilada hasta el eliminar el exceso de colorante.
  8. Secar la preparación al aire, o entre dos papeles de filtro, teniendo especial cuidado en el segundo caso para no arrastrar la extensión.
  9. Observar al microscopio óptico y anotar los resultados.

Resultados

Utilizamos un microorganismo adecuado para esta práctica, un bacilo del género Bacillus que nos permitiese ver esporas.

Tinción de esporas mediante técnica de wirtz

Al microscopio pudimos observar tanto endosporas como exosporas. También pudimos apreciar bien los microorganismos gracias al colorante de contraste. El dibujo es una representación gráfica de un campo cualquiera del microscopio, donde se aprecian los bacilos, teñidos de color rosado debido a la safranina, y sus esporas, teñidas de color azul oscuro o verde azulado debido al verde malaquita.

Observaciones

Un minuto de safranina resultó insuficiente y no se producía el contraste buscado. Aumentamos el tiempo de tinción a tres minutos con mejores resultados.

Por necesidad utilizamos agua desionizada en lugar de agua destilada.

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