Tinción de corpúsculos metacromáticos por método de Loeffler

La tinción de corpúsculos metacromáticos por método de Loeffler fue una práctica que realicé mientras cursaba la asignatura de microbiología. Durante el segundo curso del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Antes de proceder con la práctica conviene comentar algunas cosas. El método de tinción para corpúsculos metacromáticos también puede recibir el nombre de Löffler. El colorante (preparado a partir de azul de metileno) puede venir identificado de ambas formas.

La práctica fue un poco “fracaso” debido a que buscábamos lactobacilos para visualizar sus corpúsculos metacromáticos. Y para ello nada mejor que usar como muestra un yogur. El problema vino cuando, entre las bacterias fermentadoras del yogur seleccionado, no encontramos más que cocos, diplococos y estreptococos. Por este motivo no realicé fotografías, ya que no había nada que ver.

La práctica, desgraciadamente, no se repitió y se dió por hecha. Pero nos quedó el fundamento, la técnica y el aprendizaje de cómo no hacer esta práctica. La opción sensata hubiera sido llevar un yogur de alguna marca como Danone, que declara abiertamente el uso de lactobacilos en sus yogures (lactobacillus bulgaricus).

Título

Tinción de corpúsculos metacromáticos por método de Loeffler.

Objetivo

Teñir los corpúsculos metacromáticos de los microorganismos presentes en una muestra.

Fundamento

Los corpúsculos metacromáticos son gránulos de reserva, normalmente fosfatos, que se encuentran en determinadas bacterias. Suelen ser de gran tamaño. Se tiñen de manera determinada, debido a su composición química, en presencia de colorantes.

Tinción de corpúsculos metacromáticos con azul de metileno Loeffler

Estos corpúsculos se tiñen con azul de metileno Loeffler o azul de Loeffler. Este colorante es un derivado preparado a partir de azul de metileno. A él se añaden otros ingredientes como agua destilada, alcohol y una disolución de potasa (KOH).

Uno de los microorganismos que poseen estos gránulos es el Corynebacterium Diphteriae, agente causal de la Difteria. El descubridor de esta bacteria, precisamente, fue Friedrich Loeffler.

Material y reactivos

  • Azul de metileno de Loeffler
  • Agua destilada
  • Yogur marca Hacendado
  • Portaobjetos
  • Mechero Bunsen
  • Papel de filtro
  • Cubeta
  • Puentes de tinción
  • Asa de siembra de platino
  • Microscopio óptico de campo brillante

Técnica

  • Realizar una extensión sobre el portaobjetos con la muestra de yogur y el asa de siembra de platino.
  • Fijar la preparación con calor ayudándonos del mechero Bunsen.
  • Teñir con azul de metileno de Loeffler durante cinco minutos haciendo uso de los puentes de tinción y de la técnica de decantación.
  • Lavar con agua destilada hasta eliminar el exceso de colorante.
  • Dejar secar la preparación al aire.
  • Observar la preparación haciendo uso del microscopio óptico.

Resultados

No pudimos observar ningún corpúsculo metacromático ya que no encontramos ningún bacilo. Tan solo observamos cocos, diplococos y estreptococos.

Observaciones

No se han observado lactobacillus, pero sí numerosos estreptococos en el yogur de la marca Hacendado. Estos estreptococos suelen ser Streptococcus Thermophilus.

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