Tiempo de lisis del coágulo de euglobulinas

El Tiempo de lisis del coágulo de euglobulinas es una práctica que realicé en la asignatura de hematología clínica. Durante la segunda evaluación del primer curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Tiempo de lisis del coágulo de euglobulinas

Objetivo

Conocer el tiempo de lisis del coágulo de euglobulinas de una muestra problema para explorar la fibrinolisis de un paciente.

Fundamento

Las euglobulinas son un grupo de proteínas presentes en el plasma que precipitan cuando éste es diluído y acidificado. Las principales euglobulinas plasmáticas son el fibrinógeno, el plasminógeno y los activadores del plasminógeno. Sin embargo, los inhibidores de la fibrinolisis no precipitan en estas condiciones y, por tanto, no son euglobulinas.

Tiempo de lisis del coágulo de euglobulinas

La determinación del tiempo de lisis del coágulo de euglobulinas, según la técnica de Von Kaulla, se inicia precipitando las euglobulinas presentes en el plasma con agua destilada y una solución de ácido acético. Esta mezcla se centrifuga a continuación y se decanta el sobrenadante surgido, para eliminar las no euglobulinas que queden en él.

Se continúa redisolviendo el sedimento de euglobulinas en un tampón alcalino, haciendo que éstas coagulen mediante la adición de trombina. Por último, se finaliza incubando a 37ºC el coágulo formado, midiendo el tiempo que tarda éste en disolverse.

Material

  • Tubos de centrífuga de plástico
  • Micropipetas automáticas de 100 y 200 microlitros
  • Pipeta de vidrio de 10 ml
  • Puntas de micropipeta
  • Asistente de pipeteo (pera)
  • Guatix
  • Papel de filtro
  • Gradilla
  • Centrífuga
  • Baño termostatado
  • Termómetro
  • Nevera ajustada a 4ºC
  • Agitador mecánico de tubos
  • Cronómetro
  • Parafilm

Reactivos

  • Solución acuosa de ácido acético al 1% v/v
  • Agua destilada enfriada a 4ºC
  • Solución tampón fosfato salido ajustado a un pH de 7,2
  • Trombina bovina a una concentración de 10 unidades NIH/ml
  • Plasma control
  • Plasma pobre en plaquetas procedente de una muestra sanguínea anticoagulada con citrato trisódico

Técnica

  1. Rotular un tubo con la letra C de control y otra con la letra M de muestra.
  2. Precipitar las euglobulinas presentes en el control y en la muestra de la siguiente manera:
    Tiempo de lisis del coágulo de euglobulinas
  3. Mezclar el contenido de los tubos mediante inversiones sucesivas.
  4. Refrigerar los tubos, a 4ºC, durante 15 minutos.
  5. Centrifugar los tubos a 3000 rpm durante 5 minutos.
  6. Retirar completamente el sobrenadante.
  7. Limpiar cuidadosamente la pared interna de los tubos con ayuda de torundas o guatix con pinzas.
  8. Redisolver las euglobulinas mediante la adición a cada tubo de 0,3 ml de solución tampón.
  9. Agitar los tubos enérgicamente hasta la redisolución total del sedimento de euglobulinas.
  10. Desencadenar la formación del coágulo de euglobulinas mediante la adición a cada tubo de 0,3 ml de trombina.
  11. Agitar los tubos suavemente.
  12. Poner los tubos en el baño termostatado ajustado a 37ºC.
  13. Verificar la formación del coágulo de euglobulinas a partir de unos 20 segundos contados desde la adición de trombina.
  14. Dejar los tubos con los coágulos en el baño de agua a 37ºC y poner en marcha el cronómetro.
  15. Observar la aparición de la lisis del coágulo, inclinando lentamente los tubos a intervalos de 10 minutos, y anotar el tiempo transcurrido hasta ese momento.

Resultado

El resultado fue de 2 horas y media.

Tiempo de lisis del coágulo de euglobulinas
Controlando la temperatura del baño termostatado con un termómetro.
Tiempo de lisis del coágulo de euglobulinas
Tubos incubándose dentro del baño termostatado.
Tiempo de lisis del coágulo de euglobulinas
Coágulo de euglobulinas. Click en la imagen para ampliar.

Interpretación de los resultados

El tiempo normal de lisis del coágulo de euglobulinas es superior a 2 horas. Cuando el tiempo es inferior se sospecha la existencia de un proceso de hiperfibrinolisis (síndrome de desfibrinación). El tiempo de lisis del coágulo de euglobulinas siempre está disminuído en las hiperfibrinolisis primarias, y puede estar descendido o ser normal en la Coagulación Intravascular Diseminada (CIVD).

También se dan tiempos acortados cuando hay aumento de t-PA (activador tisular de plasminógeno), en hepatopatías, en deficiencias de PAI (inhibidor del activador de plasminógeno), en deficiencias de alfa-2 antiplasmina y cuando hay mucho estrés.

En cambio, los tiempos pueden estar alargados en nefropatías y en los aumentos de PAI.

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