Test de Coombs Directo (TCD)

El Test de Coombs Directo (TCD) es una técnica muy utilizada en el laboratorios de inmunohematología del área de Banco de Sangre. Esta prueba analítica recibe otros nombres como Prueba de la Antiglobulina Humana (PAH) directa o Test de la Antiglobulina Humana (TAH) directa.

Se utiliza de forma individual o como parte de otras técnicas. En éstos casos forma parte del paso final, el cual es conocido como «llevar a Coombs«. Existe otra variante de esta técnica denominada Test de Coombs Indirecto (TCI).

Orígenes del Test de Coombs Directo

El origen del Test de Coombs data de 1945, año en que fue descrita por Robert Russell Race, Arthur Morant y Robin Coombs. De éste último, precisamente, tomó el nombre la técnica.

Cuenta la leyenda que Robin Coombs diseñó mentalmente el Test de Coombs Directo mientras realizaba un viaje en tren. Imaginó a los hematíes recubiertos de anticuerpos e ideó la utilización de una antiglobulina para aglutinarlos y demostrar, de este modo, la existencia de dichos anticuerpos adheridos a la membrana de los hematíes.

Utilidad del Test de Coombs Directo

Este test se utiliza para la detección de hematíes sensibilizados in vivo, es decir, hematíes recubiertos por anticuerpos. Éstos pueden ser de clase IgG, IgM, IgA y/o fracciones del Complemento. Los hematíes de la muestra son enfrentados directamente a la antiglobulina humana, también llamado Suero de Coombs.

Esta técnica es muy útil para:

  • El diagnóstico de la Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido (EHRN). Esta enfermedad también es conocida como Eritroblastosis Fetal y como Enfermedad Hemolítica Feto-Neonatal (EHFN).
  • El diagnóstico de la Anemia Hemolítica Autoinmune (AHAI).
  • La investigación de hematíes sensibilizados por medicamentos.
  • La investigación de reacciones transfusionales.

También es muy útil en situaciones dispares como unas pruebas cruzadas incompatibles en un paciente con Escrutinio de Anticuerpos Irregulares (EAI) negativo. Es relativamente común realizar un Test de Coombs Directo a un Concentrado de Hematíes Filtrados (CHF) y que sus hematíes den positivo, desvelando así la causa de la incompatibilidad.

Material necesario para realizar el Test de Coombs Directo

  • Tubos de centrífuga, de ensayo o de vidrio con las medidas necesarias para su uso en una centrifugadora-lavadora
  • Centrífuga
  • Pipetas pasteur
  • Suero salino fisiológico (SSF) al 0,9% NaCl
  • Suero de Coombs poliespecífico y/o Suero de Coombs monoespecífico (Anti-IgG, Anti-IgM, Anti-IgA y Anti-Complemento)
  • Muestra de sangre anticoagulada con EDTA

Técnica del Test de Coombs Directo

  1. Hacer una dilución al 3% de los hematíes de la muestra.
  2. Dispensar dos gotas de esta dilución en un tubo.
  3. Lavar los hematíes tres veces con SSF.
  4. En el último lavado decantar completamente el suero salino, dejando el botón hemático.
  5. Añadir dos gotas de Suero de Coombs poliespecífico.
  6. Homogeneizar, centrifugar 10 minutos a 1500 rpm y resuspender el botón hemático para comprobar si existe aglutinación.
Test de Coombs Directo
Suero de Coombs poliespecífico (IgG+C3D)

La técnica es idéntica si se utiliza un Suero de Coombs monoespecífico en lugar del poliespecífico. De este modo se puede identificar si la sangre problema está sensibilizada por la fracción C3D del complemento o por un anticuerpo de clase IgG, IgA o IgM. Si alguno de los monoespecíficos es positivo, es muy probable que sea necesario, además, titular tanto del poliespecífico como el monoespecífico si han dado positivo.

Los antisueros monoespecíficos son Anti-IgA, Anti-C3D, Anti-IgM y Anti-IgG.

Test de Coombs Directo en autoanalizador

Debido a la sensibilidad de los autoanalizadores, muchos laboratorios optan por realizar un Test de Coombs Directo en tubo si el TCD del autoanalizador da positivo. Si la prueba es positiva en autoanalizador pero negativa en tubo, la prueba se cataloga como negativa. En cualquier caso, hablando en términos de la prueba a un Recién Nacido (RN), si la prueba es positiva en autoanalizador se debe avisar al Nido, aunque posteriormente la prueba en tubo sea negativa y se transfiera este resultado informáticamente.

Test de Coombs Directo
Test de Coombs Directo negativo en autoanalizador Ortho Autovue

Es muy común obtener un resultado positivo en autoanalizador de 0,5 y que sea negativo en tubo. Es un falso positivo que no debe evitar el aviso al Nido para la vigilancia del RN al que pertenece la muestra. El resultado se transferirá como Negativo con una nota adjunta que incluya el contenido «Test de Coombs Directo positivo en autoanalizador (Cantidad de cruces) y negativo en tubo. Se valida el resultado como negativo. Avisado Nido«.

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