Resistencia Globular Osmótica (RGO)

La Resistencia Globular Osmótica (RGO) es una práctica que realicé en la asignatura de hematología. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Resistencia Globular Osmótica (RGO).

Objetivos

  • Realizar la RGO, o ROE, a una muestra de sangre.
  • Calcular la H50 de esa misma muestra problema.
  • Aprender a utilizar el espectrofotómetro o, como era en nuestro caso, el fotocolorímetro.

Fundamento

La Resistencia Globular Osmótica (RGO) también se puede denominar Resistencia Osmótica Eritrocitaria (ROE) o Prueba de fragilidad osmótica. Se define como la capacidad que tienen los hematíes para resistir el efecto hipotónico del medio.

Se determina incubando los hematíes en soluciones salinas hipotónicas y valorando la hemólisis que se produce como resultado de la entrada de agua desde el medio hacia el interior de los hematíes.

Resistencia Globular Osmótica (RGO)

La RGO se expresa como la concentración de NaCl necesaria para producir un 50% de hemólisis. A dicha concentración se le denomina H50. La RGO es inversamente proporcional a ésta, es decir, si la Resistencia Globular Osmótica es mayor, el valor de la H50 será menor, y viceversa.

Los valores de referencia son:

  • Prueba inmediata (muestra reciente): H50 = 0,36 – 0,42%.
  • Prueba incubada (muestra incubada): H50 = 0,45 – 0,52%.

Cuando existe una alteración de la forma que conlleve una disminución de la relación superficie/volumen, la resistencia osmótica eritrocitaria es menor (H50 aumentada). Así ocurre en la esferocitosis hereditaria, estomatocitosis congénica, ovalocitosis hereditaria o en la anemia hemolítica microangiopática.

Si la relación superficie/volumen aumenta, la fragilidad osmótica es mayor (H50 disminuida), como ocurre en la xerocitosis, anemia ferropénica, reticulocitosis, beta-talasemia menor, hemoglobinopatía S y hemoglobinopatía C.

Material

  • Centrífuga
  • Espectrofotómetro o fotocolorímetro
  • Diez tubos de ensayo
  • Pipetas de vidrio
  • Pera para pipeta
  • Pipetas pasteur
  • Micropipeta automática
  • Puntas de micropipeta
  • Papel milimetrado
  • Suero salino fisiológico (NaCl 0,9%)
  • Vasos de precipitado
  • Parafilm

Reactivos

  • Soluciones de NaCl en las siguientes concentraciones, en tanto por ciento: 0, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 y 0,9. Todas ellas se preparan a partir de una solución madre de NaCl de 9 g/l.
  • Sangre anticoagulada con EDTA.

Técnica

  1. Rotular 10 tubos de centrífuga y colocarlos ordenadamente en una gradilla.
  2. Poner en cada uno de ellos 10 ml de solución salina con las diferentes concentraciones.
  3. Añadir a cada tubo 50 microlitros de sangre anticoagulada con EDTA. Importante homogeneizar bien la sangre antes de dispensarla en los tubos.
  4. Tapar con parafilm los tubos y mezclar suavemente por inversión.
  5. Dejar a temperatura ambiente durante una hora.
  6. Centrifugar a 2800 rpm durante 5 minutos.
  7. Recoger el sobrenadante con una pipeta pasteur y pasarlo a tubos limpios, rotulados con su número correspondiente.
  8. Leer la absorbancia de cada uno de los sobrenadantes a 546 nm. La lectura se realiza con una misma cubeta, utilizando el tubo número 1 como blanco y leyendo el resto de forma ordenada (1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 y 18).
  9. Hallar los porcentajes de hemólisis de cada tubo utilizando los resultados de las absorbancias.
  10. Extrapolar los resultados en una hoja de papel milimetrado para realizar la curva de resistencia globular osmótica o resistencia osmótica eritrocitaria.
  11. Determinar sobre la gráfica el valor de NaCl para el que corresponde la hemólisis al 50% (H50).

Resultado e interpretación

Resistencia Globular Osmótica (RGO)
Resultados obtenidos plasmados en una tabla.
Resistencia Globular Osmótica (RGO)
Representación gráfica de los datos de la Resistencia Globular Osmótica (RGO).

Esta gráfica representada sobre una hoja de papel milimetrado nos permitiría extrapolar el valor del 50% de hemólisis y sacar el valor del H50. En este caso el valor superaría el 0,45% de [NaCl] y, por tanto, la RGO estaría disminuída.

Resistencia Globular Osmótica (RGO)
Preparación de la batería de tubos.
Resistencia Globular Osmótica (RGO)
Pipeteo de suero salino fisiológico.
Resistencia Globular Osmótica (RGO)
Incubando la batería de tubos a temperatura ambiente durante 1 hora.
Resistencia Globular Osmótica (RGO)
Centrifugando los tubos.
Resistencia Globular Osmótica.
Tubos centrífugados. Se aprecia la hemólisis que han sufrido los hematíes en los últimos tubos y la falta de hemólisis en los primeros donde las concentraciones de NaCl son superiores a 0,5 g/dl.
Resistencia Globular Osmótica (RGO)
Realizando las lecturas en el fotocolorímetro.
Resistencia Globular Osmótica (RGO)
Lectura del primer tubo de una bateria preparada (números pares) por otros compañeros.

Observaciones

La práctica constaba de 18 tubos numerados del 1 al 18. Unos cuantos grupos realizaron los impares, incluyendo al 18, y el resto de grupos realizaron los números pares con concentraciones de NaCl de 0,85, 0,75, 0,65…

La curva no salió como en un principio se preveía, ya que los datos de absorbancia eran dispares y arrojaban datos de hemólisis superiores al 100%. Los hematíes de la muestra tampoco ayudaron ya que, para sorpresa de todos, la muestra de sangre de una compañera contenía hematíes que resistían la hemólisis frente al agua desionizada.

Las posibles explicaciones pueden ir desde la mala calidad del agua desionizada utilizada como diluyente hasta las malas lecturas del fotocolorímetro, pasando por una inexperta ejecución de la técnica.

2 comentarios en “Resistencia Globular Osmótica (RGO)”

  1. HOLA COMO ESTÁN SOY DEL ESTADO NUEVA ESPARTA MI NIETO TIENE 6 MESES SE LE REALIZO UN FROTIS DE SANGRE PERIFÉRICA QUE REPORTA PRESENCIA DE ESFEROCITOS , MOTIVP POR EL CUAL SE LE MANDA A HACER FRAGILIDAD OSMOTICA. NECESITAMOS SABER DONDE REALIZAN ESTE EXAMEN EN PUERTO LA CRUZ O BARCELONA O EN QUE LUGAR DE VENEZUELA Y CUANTO CUESTA .RESPONDER A MI CORREO . bettymarcano012016@gmail.com

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