Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer

El Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer es una práctica que realicé en la asignatura de hematología. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer

Objetivos

Fundamento

El recuento de leucocitos mediante cámara consiste en determinar el número de ellos presentes en un volumen determinado de sangre diluída. A esta muestra se le lisan los hematíes para facilitar la visualización y recuento de leucocitos. La muestra de sangre se diluye lo suficiente para que los leucos estén separados unos de otros y así poder contarlos. El recuento se realiza en una cámara de Neubauer o similar de dimensiones conocidas.

La profundidad de la cámara es de 0,1 mm. Los cuadrados de las esquinas miden 1 mm2 de superficie y están subdivididos en 16 cuadrados más pequeños de 0,25 mm de lado. El cuadrado del centro está dividido en 16 cuadrados de 0,2 mm de lado y éstos a su vez están subdivididos en 16 cuadrados de 0,05 mm de lado.

Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer

En el recuento de leucocitos se emplean líquidos de dilución que lisan los hematíes. El diluyente más utilizado es el líquido de Türk, que contiene ácido acético glacial con la finalidad de destruir los hematíes. Este líquido está compuesto por ácido acético glacial, violeta de genciana al 1% y agua destilada.

Los valores de referencia en el recuento de leucocitos son de 5-10 Gigaleucos por litro (Gl/L) para hombres y mujeres. O lo que es lo mismo, 5000-10000 leucocitos/mm3.

Cuando los valores son superiores a los de referencia estamos ante una leucocitosis. Y si son inferiores estaremos ante una leucopenia.

Material

  • Pipeta de 2 ml
  • Micropipeta automática de 20 microlitros
  • Puntas de micropipeta
  • Guatis
  • Cubreobjetos
  • Cámara de Neubauer
  • Tubo de ensayo
  • Microscopio óptico

Reactivos

  • Sangre anticoagulada con EDTA
  • Líquido de Türk

Técnica

  1. Con una pipeta echar en un tubo de ensayo 2 ml de líquido de Türk.
  2. Con la micropipeta automática de 20 microlitros retirar dicho volumen del tubo de ensayo.
  3. Echar 20 microlitros de sangre anticoagulada homogeneizada en el tubo, haciendo un factor de dilución de 1/100.
  4. Homegeneizar bien la mezcla.
  5. Incubar 5 minutos.
  6. Poner el cubreobjetos sobre la cámara de Neubauer.
  7. Cargar la cámara, por capilaridad, con la micropipeta automática.
  8. Incubar 5 minutos con la cámara cargada.
  9. Observar al microscopio óptico, realizando un recuento de leucocitos en los 4 cuadrados grandes de las esquinas. Estos cuadrados tienen, a su vez, 16 cuadrados más pequeños.

Resultado

Se leyeron los 16 cuadrados pequeños de cada cuadrado grande situado en las esquinas. Es conveniente tener cuidado al contar los leucocitos que están en contacto con las rayas que delimitan los cuadrados. Si un leucocito está en contacto con las rayas superior y derecha, entonces se cuenta. En cambio, si está en contacto con las rayas inferior e izquierda, no se cuenta.

Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer
Resultado del recuento de leucocitos anotado en una tabla de Microsoft Excel.

Los conteos fueron los siguientes: 5, 4, 1 y 5, haciendo una suma de 15 leucocitos en esos cuatro cuadrados grandes. El cálculo consiste en una simple regla de 3, si hay 15 leucocitos en 4*(1*1*0,1) mm3, en 1 mm3 habrá X leucocitos. La resolución de esta regla de 3, una vez despejada la X, es de 37,5 leucocitos/mm3 diluídos.

Esa cifra hay que multiplicarla por la inversa del factor de dilución (1/100), es decir, 37,5*100 = 3750 leucocitos/mm3 o, lo que es lo mismo, 3,75 Gl/L.

Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer
Líquido de Türk.
Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer
Material de la práctica.
Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer
Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer.

Interpretación de los resultados

Los valores de referencia son de 5000-10000 leucocitos/mm3. La cifra obtenida en la práctica es inferior a ese rango de valores, por tanto estamos ante una leucopenia.

Observaciones

La muestra era muy vieja y ocurrió lo mismo que en el recuento de hematíes, donde la cifra era inferior a los valores de referencia. En esta ocasión todos los grupos obtuvieron valores inferiores, haciendo unánime la causa general de dicho resultado: la vejez de la muestra sanguínea problema.

La cuantificación de células mediante cámara de recuento, o hemocitómetros, son técnicas con un elevado margen de error, especialmente en el recuento de hematíes donde puede llegar a ser del 20%. En determinadas circunstancias el error puede ser incluso mayor (vejez de la muestra, muestra de sangre con coágulos, material sucio, mala calibración de pipetas, etc.)

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