Realización de un API 20E

La Realización de un API 20E es una práctica que realicé en la asignatura de microbiología clínica. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Realización de un API 20E

Objetivo

Identificar un microorganismo problema mediante la realización de un API específico (API 20E) para el tipo de microorganismo que estamos buscando. En este caso se trata de una Enterobacteriacea.

Fundamento

Es un sistema que supone la realización de 20 pruebas. Consta de 20 microtubos que contienen los medios deshidratados. Éstos medios se incuban con una suspensión de bacterias que, además de inocular el microorganismo, los hidrata.

Durante la incubación el metabolismo del microorganismo genera cambios de color en el medio o bien éstos se producen al añadir los reactivos.

La interpretación de estos cambios se realiza mediante tablas de lectura o mediante un software informático. La batería consta de 20 pruebas.

API 20E

  • ONPG: Prueba de la ONPG.
  • ADH, LDC y ODC: Son pruebas de descarboxilación, porque detectan la presencia de descarboxilasas. La LDC es la Lisina Descarboxilasa, la ODC la Ornitina descarboxilasa y la ADH es la Arginina Dihidrolasa.
  • CIT: Prueba del Citrato.
  • SH2: Prueba de la fermentación triple.
  • Ureasa: Prueba de la Ureasa.
  • TDA: Triptófano desaminasa. Prueba del metabolismo de los compuestos nitrogenados, que pone de manifiesto si el microorganismo posee la enzima triptófano desaminasa. El medio lleva triptófano, y si el microorganismo posee dicha enzima originará amoniaco y un compuesto que, cuando se le añade Cl3Fe aparece un color marrón de manera inmediata, indicando que es positiva. Si el medio queda de color amarillo la prueba es negativa. Se le adiciona una gota de reactivo de TDA para revelar la positividad si la hubiere.
  • IND: Prueba del Indol
  • VP: Voges-Proskauer.
  • GEL: Prueba de la Gelatinasa.
  • GLU, MAN, INO, SOR, RHA, SAC, MEL, AMY y ARA: Fermentación/Oxidación de Hidratos de Carbono (Glucosa, Manosa, Inositol, Sorbitol, Ramnosa, Sacarosa, Melibiosa, Amigdalina y Arabinosa).
  • OX (Prueba de la Oxidasa), NO2 y N2 (Prueba de reducción de Nitratos), MOB (Examen de movilidad en un porta), MaC (Sembrar en McConkey para metabolismo de lactosa), OF-O y OF-F (Oxidación-Fermentación de Hugh-Leifson): Estas pruebas forman parte del API pero no de la batería de 20 pruebas de los microtubos. Se realizan externamente.

Material y Reactivos

  • Galería de pruebas API 20E de la casa comercial Biomérieux
  • Microorganismo problema procedente de un cultivo joven
  • Ampolla de 5 ml de suero salino fisiológico
  • Hilo de siembra de platino
  • Pipeta pasteur
  • Papel de filtro
  • Mechero Bunsen
  • Portabjetos
  • P-fenil-diamina (oxidasa)
  • Reactivos reveladores de Voges Proskauer, Indol y TDA
  • Cámara
  • Estufa
  • Libro de interpretación API
  • Parafina estéril

Técnica

  1. Preparar la cámara llenando los alveolos de agua destilada.
  2. Preparar el inóculo, tomando una colonia aislada con un asa estéril y realizar una suspensión de bacterias en un tubo que contenga 5 ml de agua destilada o suero salino fisiológico estéril.
  3. Realizar la prueba de la oxidasa al microorganismo problema.
  4. Sacar la galeria de microtubos de la bolsa hermética.
  5. Comenzar a inocular la galería de microtubos siguiendo los puntos siguientes.
  6. Llenar el tubo y la cúpula en CIT, VP Y GEL.
  7. Llenar los tubos, pero no las cúpulas, en los demás test.
  8. Proceder al llenado de las cúpulas de los test subrayados (ADH, LDC, ODC, URE y SH2) con aceite de parafina estéril para obtener un ambiente anaeróbico.
  9. Situar la galeria dentro de la cámara.
  10. Meterlo en la estufa e incubar entre 35ºC y 37ºC durante 18-24 horas.
  11. Sacar de la estufa e interpretar los resultados.
  12. Si la glucosa y/o tres o más pruebas son positivas hay que efectuar el revelado de los test que requieren reactivos, que son VP, TDA e IND.
  13. Si la glucosa da negativo y/o el número de test positivos es menor o igual a 2, se investiga el metabolismo óxido-fermentativo en un tubo de Hugh-Leifson (dos últimas pruebas: OF-O y OF-F).
  14. Se siembra en McConkey (McC) para ver el metabolismo de la lactosa.
  15. Se comprueba la movilidad (MOB).
  16. Reincubar la galería durante 24-48 horas.
  17. Si la glucosa y/o tres pruebas dan positivo, hay que efectuar el revelado de los test que requieren reactivos (VP, TDA e IND). En cambio, si el resultado sigue siendo el mismo (glucosa negativo y nº test positivos igual o inferior a 2) no se puede identificar el microorganismo como una enterobacteria.
  18. Se procede a la identificación a partir de un perfil numérico.

Resultado e interpretación

En la hoja de resultados los test están divididos en grupos de tres y se indica para cada tubo un valor de 1, 2 y 4. La galería API 20E consta de 20 ensayos y el número en el interior de cada tubo corresponde al valor de cada test.

El test de la oxidasa es el ensayo número 21, después se suma el valor de los resultados de los test positivos por cada grupo y se obtiene un código de 7 cifras.

Para la identificación del perfil numérico, éste se realiza con la ayuda de un catálogo localizando el número en la lista de perfiles o con la ayuda de un software informático. En algunas ocasiones el perfil de 7 cifras resulta insuficiente y es necesario realizar una serie de test complementarios.

Realización de un API 20E
Resultado del API 20E.
Realización de un API 20E
API 20E.
Realización de un API 20E
Comparando el resultado del API 20E con el API 20E control.

Todos los resultados se compararon con la galería control para determinar, o para confirmar, la positividad o negatividad de cada prueba.

Los resultados se trasladaron a una plantilla para realizar la suma de valores, obtener el código de identificación del microorganismo y la posterior búsqueda e identificación del mismo en el libro.

Realización de un API 20E
Identificación del microorganismo tras la resolución del API 20E.

Observaciones

En primera instancia la glucosa y/o más de tres pruebas resultaron positivas, por lo que se procedió a revelar VP, IND y TDA.

El resultado obtenido de siete dígitos fue suficiente para identificar al microorganismo. Si esto no hubiese sido así se tendrían que haber realizado las otras seis pruebas complementarias.

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