Prueba de reducción de Nitratos

La Prueba de reducción de Nitratos es una práctica que realicé en la asignatura de microbiología clínica. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Prueba de reducción de Nitratos

Objetivo

Comprobar si el microorganismo problema posee la enzima nitrato reductasa y si ha reducido los nitratos a nitritos, o a otra cosa.

Fundamento

Se pone en contacto el microorganismo problema con un medio que tenga nitratos y se detectan los productos finales.

Prueba de reducción de Nitratos

En función de estos productos finales se podrá conocer si el microorganismo ha reducido los nitratos o no. Por tanto, comprobaremos si el microorganismo problema posee la enzima nitrato reductasa, también llamada complejo nitratasa.

Material y reactivos

  • Microorganismo problema procedente de un cultivo joven
  • Medio de cultivo que contenga nitratos
  • Asa de siembra de platino
  • Mechero bunsen
  • Papel de filtro
  • Estufa de cultivo
  • α-Naftilamina al 0,5%
  • Ácido sulfanílico al 0,8%
  • Polvo de zinc
  • Balanza analítica que discrimina miligramos

Técnica

  1. Coger un inóculo de un microorganismo problema producedente de un cultivo joven, haciendo uso para ello de un asa de siembra de platino.
  2. Sembrar el microorganismo problema, en un medio que contenga nitratos, mediante la técnica de agitación.
  3. Incubar a 37ºC de 12 a 24 horas.
  4. Añadir 1 ml del reactivo α-Naftilamina al 0,5%.
  5. Añadir, a continuación, 1 ml de ácido sulfanílico al 0,8%.
  6. En función del resultado obtenido (ver resultado e interpretación) añadir 20 mg de polvo de zinc al medio de cultivo.
  7. Visualizar y anotar el resultado.

Resultado e interpretación

Si se forma un color rojo, o rosado, antes de treinta segundos es que había nitritos (Nitrato positivo). En caso contrario, se le añaden 20 mg de polvo de Zn al medio. Si aparece color rosa es que había nitratos que no se habían reducido (Nitrato negativo), y si aparece el mismo color es que se habían reducido los nitratos, pero no a nitritos.

Tras añadir los reactivos α-Naftilamina y ácido sulfanílico en el tubo con el microorganismo problema, el medio ha adquirido un color rojo que indica que se han reducido los nitratos a nitritos. Por tanto el microorganismo es Nitrato positivo y posee la enzima nitrato reductasa.

Prueba de reducción de nitratos
Control negativo de la prueba de reducción de Nitratos.
Prueba de reducción de nitratos
Cuatro tubos Nitrato positivo cuyos microorganismos poseen la enzima Nitrato reductasa, responsable de la reducción de los nitratos a nitritos.

Observaciones

El motivo por el que se utiliza polvo de zinc, si el resultado inicial obtenido es negativo, es porque es un potente reductor.

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