La Prueba de la ONPG es una práctica que realicé en la asignatura de microbiología clínica. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.
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Título
Prueba de la ONPG (Orto Nitro Fenil Galactopiranósido).
Objetivo
Identificar si un microorganismo problema fermenta o no la lactosa.
Fundamento
Los microorganismos que fermentan la lactosa pueden poseer uno o dos enzimas. Una de ellas es la lactosapermeasa, que está en la membrana y es capaz de transportar la lactosa, a través de ella, hasta el interior del microorganismo. Otra es la β-D-Galactosidasa, que es una enzima que está en el interior y desdobla la lactosa en glucosa y galactosa.
Prueba de la ONPG
Se pone en contacto el microorganismo problema con un compuesto como la ONPG, sustituyendo a la lactosa. La ONPG por acción de la β-D-Galactosidasa produce un compuesto coloreado. Si ésto ocurre es porque el microorganismo problema presenta la enzima.
Material y reactivos
- Tubo de centrífuga
- Microorganismo problema procedente de un cultivo
- Asa de siembra de platino
- Agua desionizada
- Mechero bunsen
- Papel de filtro
- Estufa de incubación
- Discos de Orto Nitro Fenil Galactopiranósido
- Pinza metálica
Técnica
- Preparar un cultivo denso del microorganismo problema en suero salino fisiológico o en agua destilada. Inocular una buena cantidad de microorganismo haciendo uso de la técnica por agitación.
- Añadir al tubo un disco de Orto Nitro Fenil Galactopiranósido.
- Incubar a 37ºC de 20 minutos a 24 horas.
- Visualizar el resultado y anotar.
Resultado e interpretación
El microorganismo problema desdobla la lactosa, ya que el medio ha virado a un color amarillo (positivo). En caso contrario, el medio hubiese permanecido incoloro (negativo).