Prueba de la catalasa

La Prueba de la catalasa es una práctica que realicé en la asignatura de microbiología. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Prueba de la catalasa.

Objetivo

Comprobar si un microorganismo problema posee la enzima catalasa.

Fundamento

La catalasa es una enzima que se encuentra en la mayoría de los microorganismos aerobios y anaerobios facultativos. Se encuentra normalmente junto a la cromoxidasa y es la responsable del desdoble del H2O2.

El agua oxigenada es uno de los productos de la degradación de los hidratos de carbono y es tóxico para nuestro organismo. Motivo por el que los hematíes poseen la enzima catalasa.

Prueba de la catalasa

Se pone en contacto el microorganismo problema con agua oxigenada. Si se desdobla y aparece O2 el microorganismo es catalasa positivo. El resultado es visible porque en caso de positividad aparecen burbujas fácilmente identificables.

Material y reactivos

  • Microorganismo problema procedente de un cultivo
  • Pipeta pasteur
  • Asa de siembra de platino
  • Portaobjetos
  • Peróxido de hidrógeno de 100 volúmenes al 30%
  • Papel de filtro
  • Mechero bunsen
  • Portaobjetos

Técnica

  1. Coger un inóculo del microorganismo problema con un asa de siembra de platino.
  2. Despositar el inóculo realizando una impronta sobre un portaobjetos o sobre un trozo de papel de filtro situado sobre el porta.
  3. Añadir una gota de H2O2.
  4. Visualizar si aparecen o no burbujas y catalogar al microorganismo como catalasa positivo o negativo.

Resultado e interpretación

Prueba de la catalasaRepresentación gráfica de la técnica

Prueba de la catalasaImpronta del microorganismo sobre papel de filtro

Si aparecen burbujas en los 10 minutos posteriores al contacto del agua oxigenada con la impronta del microorganismo, el resultado es positivo. En caso contrario el resultado será negativo.

El resultado de esta práctica fue positivo, ya que el microorganismo tenía la enzima catalasa. La presencia de burbujas fue clara pese a que fue imposible tomar una fotografía donde se visualizasen.

Observaciones

No se deben usar microorganismos procedentes de cultivos en agar sangre o agar chocolate ya que producen falsos positivos.

Tampoco se debe utilizar un asa de siembra de platino para mezclar el agua oxigenada con el microorganismo, ya que el platino cataliza la reacción. Lo ideal sería utilizar un asa de siembra desechable de plástico, pero no las había en el laboratorio.

Finalmente, esta práctica no debe realizarse siempre con cultivos jóvenes.

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