Perfil lipídico

La determinación de un perfil lipídico es una práctica que realicé en la asignatura de bioquímica clínica. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Perfil lipídico

Objetivo

Realizar el perfil lipídico (determinación cuantitativa de LDL, HDL, Colesterol y Triglicéridos) de una muestra problema.

Fundamento

El perfil lipídico está compuesto por una serie de parámetros analíticos que se determinan de manera cuantitativa.

Perfil lipídico

Los parámetros a determinar son cuatro en total:

  • Colesterol
  • Triglicéridos
  • LDL
  • HDL

Colesterol

El colesterol de la dieta se absorbe parcialmente. También se sintetiza en el hígado y otros tejidos. El colesterol se transporta en el plasma en las lipoproteínas y se excreta a la bilis como tal o tras su transformación en ácidos biliares. La medida de la concentración del colesterol se utiliza en el diagnóstico y tratamiento de la arteriosclerosis y enfermedad de las arterias coronarias. También se utiliza en el diagnóstico de desórdenes metabólicos de lípidos y lipoproteínas. El colesterol total depende de numerosos factores como la edad, el género, la dieta, la actividad física, etc.

El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado según la reacción química diseñada por la casa comercial del kit. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de colesterol presente en la muestra analizada.

Triglicéridos

Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula. Al igual que el colesterol, son transportados a las células del organismo por las lipoproteínas en la sangre. Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar los niveles de triglicéridos. Su aumento es relativamente inespecífico. Diversas dolencias, como ciertas disfunciones hepáticas (cirrosis, hepatitis, obstrucción biliar) o diabetes mellitus, pueden estar asociadas con su elevación.

Los triglicéridos incubados con lipoproteinlipasa liberan glicerol y ácidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por glicerolfosfato deshidrogenasa y ATP en presencia de glicerolquinasa para producir glicerol-3-fosfato y adenosina-5-difosfato. El G3P es entonces convertido a dihidroxiacetona fosfato y peróxido de hidrógeno por GPO. Al final, el peróxido de hidrógeno reacciona con 4-aminofenazona y p-clorofenol, reacción catalizada por la peroxidasa, dando una coloración roja.

LDL

Las partículas de LDLc son lipoproteínas que transportan el colesterol a las células. Niveles elevados de colesterol LDL son un factor de riesgo de desarrollo de enfermedades cardiovasculares. A menudo se le denomina “colesterol malo”. Niveles altos de colesterol LDL están relacionados con obesidad, diabetes y nefrosis.

Determinación directa del LDLc (colesterol de lipoproteínas de baja densidad) sin necesidad de pre-tratamiento o centrifugado de la muestra. La determinación se realiza en dos pasos: Eliminación de lipoproteínas no-LDL y medición de LDLc. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de LDLc presente en la muestra problema.

HDL

Las partículas de HDL son lipoproteínas de alta densidad que transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado. Debido a que las HDL pueden retirar el colesterol de las arterias y transportarlo de vuelta al hígado para su excreción, se las conoce como colesterol bueno o «lipoproteínas buenas», ya que niveles elevados están relacionados con un menor riesgo cardiovascular. Un nivel bajo de colesterol HDL es considerado uno de los principales factores de riesgo cardiovascular y enfermedades de las arterias coronarias.

Determinación directa del HDLc (colesterol de lipoproteínas de alta densidad) sin necesidad de pre-tratamiento o centrifugado de la muestra. La determinación se realiza en dos pasos: Eliminación de lipoproteínas no-HDL y medición de HDLc. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de HDLc presente en la muestra problema.

Material y reactivos

  • Espectrofotómetro o fotocolorímetro
  • Micropipetas
  • Puntas de micropipetas
  • Papel de filtro
  • Cubetas de espectrofotómetro de plástico
  • Agua destilada
  • Kit de determinación de Colesterol BSM (REF: CHO-004)
    • R: Reactivo de trabajo
    • S: Patrón primario acuoso de Colesterol 200 mg/dL
  • Kit de determinación de Triglicéridos BSM (REF: TRI-014)
    • R: Reactivo de trabajo
    • S: Patrón primario acuoso de Triglicéridos
  • Kit de determinación de LDL BSM (REF: LDL-025 / LDL-125 )
    • R1: Reactivo enzimático
    • R2: Reactivo enzimático
    • HDLc/LDLc CAL: Patrón. Suero humano liofilizado
  • Kit de determinación de HDL Spinreact (REF: 1001096 /7/8/9)
    • R1 y R2
    • HDLc/LDLc CAL: Patrón. Suero humano liofilizado

Técnica

Colesterol

  1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
  2. Pipetear en cubetas de espectrofotómetro:

    Perfil lipídico
  3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC ó 10 minutos a 15ºC-25ºC.
  4. Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, a 500-520 nm de longitud de onda, frente al blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 60 minutos.

Triglicéridos

  1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
  2. Pipetear en cubetas de espectrofotómetro:

    Perfil lipídico
  3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC ó 10 minutos a temperatura ambiente.
  4. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, a 490-550 nm de longitud de onda, frente al blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.

LDL

  1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
  2. Pipetear en cubetas de espectrofotómetro:

    Perfil lipídico
  3. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC.
  4. Añadir a cada cubeta:

    Perfil lipídico
  5. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC.
  6. Leer la absorbancia (A), a 590-700 nm de longitud de onda, frente al blanco de reactivo.

HDL

  1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
  2. Pipetear en cubetas de espectrofotómetro:

    Perfil lipídico
  3. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC.
  4. Leer la absorbancia (A1), a 600-700 nm de longitud de onda del calibrador y la muestra.
  5. Añadir a cada cubeta:

    Perfil lipídico
  6. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC.
  7. Leer la absorbancia (A2), a 600-700 nm de longitud de onda del calibrador y la muestra.

Resultados

Colesterol

Se realizaron lecturas de una muestra y un control patológico de concentración conocida que nos servirá para determinar la validez (o falta de) de la prueba. Estas lecturas se hicieron a una longitud de onda de 500 nm.

Perfil lipídico

Para obtener el resultado en forma de concentración, tanto de la muestra como del control patológico, hacemos uso de la fórmula presente en el protocolo de la práctica. El valor de la concentración del patrón es conocida: 236 mg/dl.

Perfil lipidico

Triglicéridos

Se realizaron lecturas de una muestra y un control patológico de concentración conocida que nos servirá para determinar la validez (o falta de) de la prueba. Estas lecturas se hicieron a una longitud de onda de 500 nm.

Perfil lipídico

Para obtener el resultado en forma de concentración, tanto de la muestra como del control patológico, hacemos uso de la fórmula presente en el protocolo de la práctica. El valor de la concentración del patrón es conocida: 234 mg/dl.

Perfil lipidico

LDL

Se realizaron lecturas de una muestra y un control patológico de concentración conocida que nos servirá para determinar la validez (o falta de) de la prueba. Estas lecturas se hicieron a una longitud de onda de 630 nm.

perfil lipidico

Para obtener el resultado en forma de concentración de la muestra, hacemos uso de la fórmula presente en el protocolo de la práctica. El valor de la concentración del patrón es conocida: 104 mg/dl.

Perfil lipidico

Perfil lipídico

HDL

Se realizaron lecturas de una muestra y un control patológico de concentración conocida que nos servirá para determinar la validez (o falta de) de la prueba. Estas lecturas se hicieron a una longitud de onda de 630 nm.

perfil lipidico

Para obtener el resultado en forma de concentración de la muestra, hacemos uso de la fórmula presente en el protocolo de la práctica. El valor de la concentración del patrón es conocida: 47 mg/dl.

Perfil lipídico

Perfil lipidico

Interpretación de los resultados

El perfil lipídico obtenido es el siguiente:

Perfil lipídico
Resultados del perfil lipídico.

Colesterol

Los valores normales son inferiores a 200 mg/dl, por tanto el resultado obtenido está dentro de dichos valores. Un valor superior a 200 implica riesgo de padecer problemas cardiovasculares ya que existe una relación directa entre la hipercolesterolemia y la aterosclerosis.

Triglicéridos

Los valores normales son de 40-160 mg/dl en hombres y 35-135 mg/dl en mujeres. Según los resultados obtenidos, si la muestra procede tanto de un hombre como de una mujer, estaríamos hablando de una hipertrigliceridemia. Existe una relación directa entre el aumento de triglicéridos y la obesidad, ya que los triglicéridos se acumulan en los adipocitos del tejido graso.

LDL

El considerado «colesterol malo», aunque sería más correcto definirlo como «la lipoproteína mala» (matizando que solo es considerada «mala» en valores superiores a los normales). Los valores normales o considerados de riesgo bajo son inferiores a 100 mg/dl, por tanto los valores de la muestra son considerados normales. Existe una relación directa entre el aumento de LDL y el riesgo de padecer aterosclerosis, ya que la lipoproteína de baja densidad (LDL) transporta una alta cantidad de colesterol con ella.

HDL

En referencia al HDL, la considerada «lipoproteína buena», los valores normales, o considerados como de riesgo bajo, son superiores a 50 mg/dl. Los resultados obtenidos están dentro de este rango de valores ya que superan dicha cifra. Existe una relación inversa entre la cantidad de HDL sanguíneo y el riesgo de padecer aterosclerosis, ya que esta lipoproteína recoge el colesterol libre y lo transporta de vuelta al hígado, reduciendo el riesgo de padecer problemas cardiovasculares mediante la formación de placas de ateroma en las arterias.

Observaciones

Los kits estaban caducados, los fotocolorímetros usados cuentan con falta de mantenimiento que asegure su fiabilidad total y las cubetas de espectrofotómetro utilizadas son de múltiples usos, contando con suciedad difícil de limpiar, polvo o rayaduras en su zona de lectura (o de paso de luz).

Por estos motivos, y los posibles fallos humanos, el perfil lipídico obtenido no es fiable en absoluto, como bien demuestran los valores obtenidos en los patrones patológicos utilizados en las pruebas del colesterol y los triglicéridos:

  • Resultado obtenido de colesterol del patrón patológico = 205,80 mg/dl
  • Valor real de colesterol del patrón patológico = 236 mg/dl
  • Resultado obtenido de triglicéridos del patrón patológico = 271,10 mg/dl
  • Valor real de triglicéridos del patrón patológico = 234 mg/dl

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