Fenilalanina desaminasa (FAD)

La Prueba de la fenilalanina desaminasa (FAD) es una práctica que realicé en la asignatura de microbiología clínica. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Fenilalanina desaminasa (FAD)

Objetivo

Comprobar si un microorganismo problema posee la enzima fenilalalina desaminasa (FAD).

Fundamento

Se pone en contacto un microorganismo problema con un medio de cultivo que contenga fenilalanina. Tras un periodo de incubación se le añade el reactivo Cl3Fe. Este reactivo pone de manifiesto la presencia del compuesto que se produce, por la acción de la FAD, al desaminarse.

Fenilalanina desaminasa (FAD)

El compuesto resultante es un compuesto ácido -ácido fenilpirúvico-, el cual reacciona con el Cl3Fe originando un color verdoso.

Material y reactivos

  • Tubo con medio de cultivo que contenga fenilalanina
  • Microorganismo problema procedente de un cultivo
  • Mechero bunsen
  • Papel de filtro
  • Pipeta pasteur
  • Asa de siembra de platino
  • Cl3Fe
  • Estufa
  • Cronómetro

Técnica

  1. Coger un inóculo del microorganismo problema, haciendo uso de un asa de siembra, procedente de un cultivo previo en placa.
  2. Sembrar el microorganismo problema en el medio de fenilalanina utilizando la técnica de slam o lengüeta.
  3. Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.
  4. Pasado el tiempo añadir 4 o 5 gotas de Cl3Fe haciendo uso de la pipeta pasteur. Procurar que se deslice bien por el agar inclinando el tubo.
  5. Esperar 2 minutos.
  6. Observar y anotar la reacción resultante.

Resultado e interpretación

Si el microorganismo posee la enzima fenilalanina desaminasa (FAD), el medio adquirirá una tonalidad verdosa sobre fondo blanco. Esto debe ocurrir en la zona de siembra donde ha crecido el microorganismo.

Fenilalanina desaminasa
Reactivo Cl3Fe necesario para la práctica.
Fenilalanina desaminasa
Tubos con fenilalanina sembrados e incubados. Listos para recibir el reactivo.
Fenilalanina desaminasa (FAD)
Microorganismo fenilalanina desaminasa positivo o FAD+.

El resultado fue que el microorganismo es FAD+ ya que el medio cambió a color verdoso sobre fondo blanco tras el contacto con el reactivo.

Observaciones

Hay que anotar el resultado en el tiempo indicado, ya que conforme pasan los minutos el color verdoso de los microorganismos positivos tiende a desaparecer. Si esto ocurriese estaríamos ante un falso negativo.

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