Determinación de IgG por Inmunodifusión Radial (IDR)

La Determinación de IgG por Inmunodifusión Radial (IDR) es una práctica que realicé en la asignatura de bioquímica clínica. Durante el segundo año de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Determinación de IgG por Inmunodifusión Radial (IDR)

Objetivo

Detectar de manera cuantitativa y cualitativa la concentración de IgG mediante Inmunodifusión Radial.

Fundamento

Esta técnica es de tipo inmunoprecipitación y consiste en hacer reaccionar un antígeno con su anticuerpo correspondiente en un medio semisólido. Este medio puede ser de gel de agar o agarosa, en placa de cristal o plástico, cuyo espesor sea uniforme y el anticuerpo esté distribuido en él.

El resultado final será la formación de un anillo de precipitación. Estos geles suelen estar coloreados para que la lectura se realice con mayor facilidad. En los geles se taladran unos pocillos de dimensiones determinadas y dentro de ellos se dispensa la muestra donde queremos cuantificar el antígeno.

Determinación de IgG por Inmunodifusión Radial (IDR)

La inmunoprecipitación es un fenómeno progresivo en el que el antígeno difunde desde el pocillo de forma radial y se redisuelve reapareciendo a una distancia mayor. Esta expansión del diámetro del anillo continúa hasta que todo el antígeno ha reaccionado con el anticuerpo, siendo el halo más grande cuanto mayor es la concentración del antígeno de la muestra.

Material y reactivos

  • Placa de IDR para IgG y para α-2 macroglobulina de 12 pocillos
  • Micropipeta automática de 5 microlitros
  • Puntas de micropipeta
  • Regla de precisión de 0,1 milímetros
  • Papel semilogarítmico
  • Sueros control de alta, media y baja concentración
  • Muestra de suero o plasma

Técnica

  1. Extraer la placa del sobre y destapar durante cinco minutos para permitir la evaporación de las gotas de condensación.
  2. Aplicar 5 microlitros de los diferentes calibradores diluidos en los cuatro primeros pocillos y los diferentes plasmas del paciente en los pocillos restantes.
  3. Esperar 20 minutos con la placa ya cerrada antes de volcarla para su incubación.
  4. Transcurridos los minutos volcar la placa y guardarla en el sobre.
  5. Dejar a temperatura ambiente durante 24/72 horas.
  6. Medir con la regla el diámetro de los halos, en milímetros.

Resultado e interpretación

Determinación de IgD por Inmunodifusión Radial (IDR)
Resultados de las mediciones.

En los pocillos 9-12 se dispensó el calibrador en distintas diluciones:

  • 9 (1): 149 mg/dl
  • 10 (1/2): 74.500 mg/dl
  • 11 (1/4): 37.250 mg/dl
  • 12 (1/8): 18.625 mg/dl

Con estos valores y un papel semilogarítmico se podría realizar una recta de calibración. Haciendo uso de papel milimetrado saldría una curva de calibración. Extrapolando los valores de medición (diámetro al cuadrado) en la recta (o en la curva) se obtendrían los valores de concentración de las distintas muestras de los pocillos.

No se pudo realizar la consecuente recta de calibración debido a que los pocillos 11 y 12 no pudieron leerse. Los pocillos destinados al calibrador se rellenaron con diferentes diluciones conocidas del mismo para poder realizar la recta de calibración.

Determinación de IgG por Inmunodifusión Radial (IDR)
Placa de Inmunodifusión Radial (IDR).
Determinación de IgG por inmunodifusión radial (IDR)
Pipeteando en los pocillos de la placa.
Determinación de IgG por inmunodifusión radial (IDR)
Realizando lecturas de los halos con la regla.

Observaciones

En los pocillos 11 y 12 no se pudo determinar medición porque el halo no se distinguía bien.

Se realizó la práctica sobre dos placas: una para determinar IgG y otra para alfa 2-macroglobulina, pero ambas placas estaban en bastante mal estado, especialmente la de alfa 2-macroglobulina. Este fue el motivo por el que las lecturas de algunos halos no se pudieron realizar.

Los resultados fueron muy dispares y ningún grupo pudo realizar la recta de calibración debido al estado de las placas.

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