Determinación del grupo hemático ABO en tubo

La Determinación del grupo hemático ABO en tubo es una práctica que realicé en la asignatura de hematología. Durante el primer curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

En este caso, el fundamento de la práctica es idéntico al de la práctica Determinación del grupo hemático ABO en portaobjetos.

Título

Determinación del grupo hemático ABO en tubo

Objetivo

Determinar el grupo hemático ABO de una muestra de sangre problema en tubo.

Fundamento

La detección del grupo sanguíneo ABO consta de dos determinaciones:

  • Grupo hemático, celular, globular o prueba directa que consiste en la determinación de los antígenos que hay en la superficie de los hematíes.
  • Grupo sérico o prueba inversa, que consiste en la determinación de los anticuerpos presentes en el suero contra los antígenos del Sistema ABO.

La determinación del grupo hemático ABO se realiza mediante pruebas de hemaglutinación directa. Para el grupo hemático se enfrentan hematíes problema a un suero con anticuerpos conocidos, mientras que en el grupo sérico se enfrenta suero problema a hematíes con antígenos conocidos. En ambos casos se consideran reacciones positivas.

En la prueba sérica, cuando se utiliza suero recién extraído puede observarse hemólisis o aglutinación. Ambos son considerados reacciones positivas.

El grupo hemático y el grupo sérico deben ser realizados por dos personas distintas para que la interpretación del resultado de una prueba no esté condicionada por el resultado de la otra.

Las pruebas de hemaglutinación, en la determinación de los grupos sanguíneos, se realizan normalmente a temperatura ambiente (20-25ºC). Aunque en algunas ocasiones es necesario hacerlo a 4º y a 37ºC.

Determinación del grupo hemático ABO en tubo

En los recién nacidos no se hace la prueba sérica porque los anticuerpos Anti-A y Anti-B no se producen hasta los 3-6 meses de vida. Si el recién nacido tiene cualquiera de estos anticuerpos serán de origen materno.

La detección del grupo hemático se realiza mezclando hematíes problema con suero Anti-A y Anti-B por separado. Se valora la presencia de aglutinación en cada una de las mezclas, ya que si aglutina significa la presencia del antígeno correspondiente al anticuerpo utilizado. Así, si aglutinan los hematíes mezclados con anti-A es debido a que esos hematíes tienen antígeno A. Si aglutinan con Anti-B tienen antígeno B. Y si aglutinan con ambos se debe a que los hematíes tienen ambos antígenos, A y B.

Cuando ninguno de los dos aglutina es porque los hematíes no tienen ninguno de los antígenos o tienen antígenos débiles. En este caso se enfrentan los hematíes a un suero anti-AB. La aglutinación indica que se trata de grupos A o B débiles. Los A débiles son más frecuentes que los B débiles. Si no hay aglutinaciçon la sangre se clasifica como grupo O.

La prueba hemática puede realizarse sobre portaobjetos (prueba en porta) o en tubos de ensayo tipo hemólisis (prueba en tubo). En ambas pruebas se utilizan los mismos reactivos, se interpretan igual los resultados y se hacen las mismas comprobaciones de grupo.

Material

  • Tubos de ensayo
  • Pipetas pasteur
  • Centrífuga
  • Microscopio
  • Portaobjetos
  • Cubreobjetos
  • Visualizador de luz de fondo
  • Microscopio óptico

Reactivos

  • Sueros Anti-A, Anti-B, Anti-AB y Anti-A1
  • Suspensión de hematíes en medio salino al 3% procedente de una muestra de sangre venosa anticoagulada con EDTA.

Técnica

  1. Rotular dos tubos de ensayo (A y B).
  2. Echar una gota de la muestra diluída al 3% en cada uno de los tubos.
  3. Añadir dos gotas de Anti-A y Anti-B a cada tubo correspondiente.
  4. Mezclar e incubar 15 minutos a temperatura ambiente.
  5. Centrifugar 2 minutos a 2000 rpm.
  6. Resuspender las muestras y observar si existe aglutinación.
  7. Confirmar los resultados realizando una preparación en fresco y observándola al microscopio óptico.

Resultado

Determinación del grupo hemático ABO en tubo
Tubos rotulados para la práctica.
Determinación del grupo hemático ABO en tubo
Aparentamente existe aglutinación en el tubo B. Esto implicaría la presencia del antígeno B en la superficie de los hematíes.
Determinación del grupo hemático ABO en tubo
Se realizó una preparación con la aparente aglutinación del grupo B y se visualizó al microscopio. Como se puede apreciar no existe aglutinación alguna.

Interpretación de los resultados

Debido a la aparente aglutinación del tubo B se repitió la técnica y no aglutinó en ninguno de los tubos. Tambien se comprobó el resultado con suero anti-AB y se confirmó, en ambas situaciones, que el grupo sanguíneo de los hematíes era O.

Observaciones

Al tratarse de una preparación en fresco y no de una extensión sanguínea hay que tener especial cuidado con el microscopio para que no se nos mueva la preparación ni se nos seque debido a la fuente de luz y el calor que ésta trasmite.

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