Determinación del grupo hemático ABO en portaobjetos

La Determinación del grupo hemático ABO en portaobjetos es una práctica que realicé en la asignatura de hematología. Durante el primer curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Determinación del grupo hemático ABO en portaobjetos

Objetivo

Determinar el grupo hemático ABO de una muestra de sangre problema sobre un portaobjetos.

Fundamento

La detección del grupo sanguíneo ABO consta de dos determinaciones:

  • Grupo hemático, celular, globular o prueba directa que consiste en la determinación de los antígenos que hay en la superficie de los hematíes.
  • Grupo sérico o prueba inversa, que consiste en la determinación de los anticuerpos presentes en el suero contra los antígenos del Sistema ABO.

La determinación del grupo hemático ABO se realiza mediante pruebas de hemaglutinación directa. Para el grupo hemático se enfrentan hematíes problema a un suero con anticuerpos conocidos, mientras que en el grupo sérico se enfrenta suero problema a hematíes con antígenos conocidos. En ambos casos se consideran reacciones positivas.

En la prueba sérica, cuando se utiliza suero recién extraído puede observarse hemólisis o aglutinación. Ambos son considerados reacciones positivas.

El grupo hemático y el grupo sérico deben ser realizados por dos personas distintas para que la interpretación del resultado de una prueba no esté condicionada por el resultado de la otra.

Las pruebas de hemaglutinación, en la determinación de los grupos sanguíneos, se realizan normalmente a temperatura ambiente (20-25ºC). Aunque en algunas ocasiones es necesario hacerlo a 4º y a 37ºC.

Determinación del grupo hemático ABO en portaobjetos

En los recién nacidos no se hace la prueba sérica porque los anticuerpos Anti-A y Anti-B no se producen hasta los 3-6 meses de vida. Si el recién nacido tiene cualquiera de estos anticuerpos serán de origen materno.

La detección del grupo hemático se realiza mezclando hematíes problema con suero Anti-A y Anti-B por separado. Se valora la presencia de aglutinación en cada una de las mezclas, ya que si aglutina significa la presencia del antígeno correspondiente al anticuerpo utilizado. Así, si aglutinan los hematíes mezclados con anti-A es debido a que esos hematíes tienen antígeno A. Si aglutinan con Anti-B tienen antígeno B. Y si aglutinan con ambos se debe a que los hematíes tienen ambos antígenos, A y B.

Cuando ninguno de los dos aglutina es porque los hematíes no tienen ninguno de los antígenos o tienen antígenos débiles. En este caso se enfrentan los hematíes a un suero anti-AB. La aglutinación indica que se trata de grupos A o B débiles. Los A débiles son más frecuentes que los B débiles. Si no hay aglutinaciçon la sangre se clasifica como grupo O.

La prueba hemática puede realizarse sobre portaobjetos (prueba en porta) o en tubos de ensayo tipo hemólisis (prueba en tubo). En ambas pruebas se utilizan los mismos reactivos, se interpretan igual los resultados y se hacen las mismas comprobaciones de grupo.

Material

  • Portaobjetos
  • Guatix
  • Lancetas
  • Pipetas pasteur
  • Puntas de micropipeta
  • Alcohol de 70ºC

Reactivos

  • Sueros Anti-A, Anti-B y Anti-AB
  • Muestra de sangre capilar

Técnica

  1. Rotular los portaobjetos.
  2. Colocar dos gotas de sangre debajo de cada rótulo.
  3. Colocar en el porta una gota de cada antisuero en su lugar correspondiente.
  4. Mezclar la muestra con el antisuero haciendo uso de una punta de micropipeta, palillos, porta o similar.
  5. Esperar y observar.
  6. Si fuera necesario realizar la prueba con suero anti-AB de la misma forma para valorar A o B débiles o confirmar grupo O.

Resultado

Determinación del grupo hemático ABO en portaobjetos
No existe aglutinación con Anti-A y Anti-B.
Determinación del grupo hemático ABO en portaobjetos
No existe aglutinación con Anti-AB, pero en cambio si lo hay en presencia de Anti-D.

Interpretación de los resultados

La sangre al no aglutinar con anti-A, anti-B ni anti-AB se considera que es del grupo O. Se añadió a la práctica el uso del antisuero anti-D para determinar el factor RH de la sangre problema. En este caso sí existió aglutinación, por lo que se pudo tipificar la sangre como O+.

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