Determinación del fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR)

La Determinación del fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR) es una práctica que realicé en la asignatura de hematología clínica. Durante la segunda evaluación del primer curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Determinación del fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR)

Objetivo

Determinar la concentración de fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR).

Fundamento

La Inmunodifusión Radial (IDR) es una técnica de inmunoprecipitación que consiste en hacer reaccionar un antígeno con su anticuerpo correspondiente en un medio semisólido. Como medio se puede utilizar gel de agarosa, teniendo en cuenta que su espesor debe ser uniforme y coloreado para visualizar mejor los anillos formados.

La reacción de inmunoprecipitación es un fenómeno progresivo, al principio las precipitaciones se van produciendo cerca del pocillo y el anillo se va alejando hasta que todo el antígeno ha difundido y se encuentra en las concentraciones equivalentes con el anticuerpo. Cuanto mayor es la concentración del antígeno de la muestra mayor es la difusión, así como el área que formará el anillo.

Determinación del fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR)

Existen muchos factores que influyen en el diámetro del anillo como el volumen de la muestra, la concentración de anticuerpo en el medio, el pH del mismo o el tiempo de incubación. Por tanto deben mantenerse estos parámetros fijos de forma que el anillo solo dependa de la concentración de antígeno de la muestra.

Se puede conocer la concentración del antígeno en el plasma del paciente de dos formas distintas:

  • Determinación rápida: Se realiza leyendo la concentración del fibrinógeno directamente de una tabla con valores precalculados. En esta tabla, presente en cada kit comercial, se compara el diámetro del anillo del pocillo y se lee directamente la concentración del fibrinógeno.
  • Determinación de alta precisión: Se realiza en una recta de calibración que se efectúa haciendo diluciones de un plasma calibrador con una concentración de fibrinógeno conocida. Lo procesamos según la técnica y se miden los diámetros al cuadrado de los anillos de precipitación. Con estas lecturas se construye la recta de calibración. En el eje de ordenadas se sitúa el diámetro elevado al cuadrado y en el eje de abscisas la concentración de fibrinógeno de las diluciones. En esta recta se interpola el valor del diámetro al cuadrado del pocillo del paciente y se obtiene la concentración de fibrinógeno.

Material

  • Placa con gel de agarosa con anticuerpo anti-fibrinógeno repartido de forma homogénea
  • Regla específica para la lectura de la placa
  • Micropipeta automática de 5 microlitros
  • Puntas de micropipeta
  • Guatix
  • Papel milimetrado
  • Lapicero y/o bolígrafo
  • Papel de filtro

Reactivos

  • Plasma calibrador
  • Muestra de plasma fresco pobre en plaquetas

Técnica

  1. Extraer la placa del sobre.
  2. Dejar destapado cinco minutos a temperatura ambiente para permitir la evaporación de las gotas de condensación.
  3. Aplicar cinco microlitros de los diferentes calibradores diluídos y de los diferentes plasmas problema en los pocillos de la placa.
  4. Esperar 20 minutos con la placa ya cerrada antes de volcarla para su incubación.
  5. Transcurrido el tiempo se vuelca la placa, se guarda y se precinta en el sobre. Se deja a temperatura ambiente, en horizontal, durante 48 horas.
  6. Finalmente medir, con la regla especial, el diámetro de los halos (en milímetros).
  7. El límite de sensibilidad del método es de 50,5 mg/dl (sensibilidad mínima) y 906 mg/dl (sensibilidad máxima). Si la concentración del paciente superase el límite superior, diluir la muestra a 1/2 con agua destilada y luego multiplicar por la inversa de la dilución el resultado final.

Resultado

La determinación rápida del fibrinógeno, mediante tabla, dio un resultado de 473 mg/dl para un diámetro al cuadrado de 50,04 mm2. Extrapolando ese valor en la recta de calibración el resultado es de 316,6 mg/dl.

Determinación del fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR)
Bancos de diluciones.
Determinación del fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR)
Material necesario para la práctica.
Determinación del fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR)
Placa con gel de agarosa con el anticuerpo anti-fibrinógeno homogéneamente repartido.
Determinación del fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR)
Midiendo los halos con la regla específica.
Determinación del fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR)
Visualización de los halos en la placa de gel de agarosa.
Determinación del fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR)
Recta de calibración de la determinación del fibrinógeno por Inmunodifusión Radial (IDR). Click en la imagen para ampliar.

Interpretación de los resultados

Los valores de referencia son 200-400 mg/dl para adultos y 150-300 mg/dl para niños. Utilizando una lectura de precisión mediante recta de calibración comprobamos que los valores de concentración de fibrinógeno de la muestra están dentro de los valores normales.

Observaciones

La incubación fue de 72 horas en lugar de 48 debido a que había un fin de semana de por medio. Es posible que ésta fuese la causa de unos resultados dispares entre grupos y entre compañeros, además de la técnica en sí, ya que con la misma muestra y el mismo tiempo de incubación, los resultados variaban en torno a 100 mg/dl de diferencia, una cantidad demasiado grande.

Deja un comentario

Uso de cookies

Este sitio web utiliza cookies para que usted tenga la mejor experiencia de usuario. Si continúa navegando está dando su consentimiento para la aceptación de las mencionadas cookies y la aceptación de nuestra política de cookies, pinche el enlace para mayor información.plugin cookies

ACEPTAR
Aviso de cookies