Determinación del fibrinógeno por el método de Clauss

La Determinación del fibrinógeno por el método de Clauss es una práctica que realicé en la asignatura de hematología clínica. Durante la segunda evaluación del primer curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Determinación del fibrinógeno por el método de Clauss

Objetivo

Realizar la determinación de la concentración de fibrinógeno funcional de una muestra problema mediante el método de Clauss.

Fundamento

El fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en fibrina. El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno presente en la muestra de plasma.

La cuantificación del fibrinógeno se puede realizar por métodos cronométricos, que exploran la funcionalidad del fibrinógeno, y por métodos antigénicos, que solo exploran su concentración.

Determinación del fibrinógeno por el método de Clauss

Los métodos cronométricos miden el tiempo que tarda en degradar un exceso de trombina al fibrinógeno presente en un plasma pobre en plaquetas. Se utiliza una trombina de una actividad de 100 U NIH/ml. Esta trombina no se ve inhibida por la presencia de heparina.

Cuando un plasma diluído se pone en presencia de un exceso de trombina, el logaritmo del tiempo de coagulación está en relación lineal con el logaritmo de la concentración de fibrinógeno de la muestra. Por tanto, si representamos los valores en un papel milimetrado, la representación será una curva. En cambio, si se representa en papel logarítmico la representación será una recta.

Material

  • Micropipetas automáticas de 50 y 1000 microlitros
  • Coagulómetro
  • Limaduras de hierro
  • Cubeta de coagulómetro
  • Puntas de micropipeta
  • Guatix
  • Papel de filtro

Reactivos

  • Trombina Bovina (Reactivo R1 que se reconstituye con 2 ml de agua destilada)
  • Tampón Imidazol (Reactivo R2)
  • Solución Caolín (Reactivo R3)
  • Plasma calibrador de concentración conocida
  • Plasma pobre en plaquetas, no ictérico, lipémico ni hemolizado

Técnica

  1. Si el paciente tiene una fibrinogenemia baja conocida diluir la muestra 1/5, mientras que si el paciente tiene una fibrinogenemia alta diluir a 1/20 (50 microlitros de muestra + 950 microlitros del tampón).
  2. Realizar la recta y la curva de calibración con los siguientes datos:


    El plasma calibrador tiene una concentración conocida de 228 mg/dl. En cada dilución se realizan dos determinaciones y se representa la media de cada una.
  3. A 0,2 ml de cada dilución añadir 20 microlitros de R3 y atemperar a 37ºC durante 4-6 minutos.
  4. Añadir 0,1 ml de reactivo R1 y cronometrar la formación de coágulos. No atemperar la trombina bovina (R1).
  5. Extrapolar la media de las dos determinaciones de la muestra en la curva de calibración.

Resultados e interpretación

La media de los dos tiempos fue de 17,12 segundos. Ese tiempo extrapolado en la recta de calibración de papel milimetrado arrojaba un valor de 299 mg/dl de fibrinógeno. En cambio, extrapolado en la curva de calibración de papel logarítmico daba un valor de 290 mg/dl. En cualquiera de los casos el resultado se encuentran dentro de los valores de referencia (200-400 mg/dl).

Determinación del fibrinógeno por el método de Clauss
Recta de calibración en papel logarítmico. Determinación del fibrinógeno por el método de Clauss.
Determinación del fibrinógeno por el método de Clauss
Curva de calibración en papel milimetrado. Determinación del fibrinógeno por el método de Clauss.

La formación de fibrinógeno y su concentración pueden estar disminuídos en trastornos congénitos como las afibrinogenemias e hipofibrinogenemias, o en trastornos adquiridos como las hepatopatías. En cambio, puede estar aumentada de forme inespecífica en inflamaciones, en estrés o en el tercer trimestre del embarazo.

Deja un comentario

Uso de cookies

Este sitio web utiliza cookies para que usted tenga la mejor experiencia de usuario. Si continúa navegando está dando su consentimiento para la aceptación de las mencionadas cookies y la aceptación de nuestra política de cookies, pinche el enlace para mayor información.plugin cookies

ACEPTAR
Aviso de cookies