Determinación del antígeno D débil (Du) en tubo

La Determinación del antígeno D débil (Du) en tubo es una práctica que realicé en la asignatura de hematología. Durante el primer curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Determinación del antígeno D débil (Du) en tubo

Objetivo

Determinar la presencia del antígeno Du, que es la expresión débil del antígeno D.

Fundamento

El antígeno Du es una variante débil del antígeno D que tiene interés desde el punto de vista transfusional. Este antígeno aglutina débilmente o no aglutina con los anticuerpos Anti-D habituales y, por tanto, es posible clasificar erroneamente al portador de este antígeno como RH negativo.

La transfusión de esta sangre a una persona RH negativo produciría sensibilización Anti-D. Por este motivo, siempre que una sangre aparente ser RH negativa se investiga la presencia del antígeno Du mediante el Test de Coombs.

Determinación del antígeno D débil (Du) en tubo

La detección del antígeno Du debe realizarse siempre que se obtenga una aglutinación negativa para el Anti-D, ya que este antígeno, aunque se una al Anti-D, no produce aglutinación.

Los hematíes que se han enfrentado al Anti-D se lavan y se incuban con antiglobulina humana (suero de Coombs). Si había Anti-D unido a los hematíes, la antiglobulina produce la aglutinación e indica la presencia del antígeno Du en la membrana de los hematíes. Si hay aglutinación la sangre se clasifica como RH positivo variante débil.

Material

  • Tubos de ensayo
  • Pipetas pasteur
  • Baño termostatado
  • Centrífuga
  • Microscopio óptico
  • Portaobjetos
  • Cubreobjetos

Reactivos

  • Suero Anti-D
  • Control negativo albuminoso
  • Suero de Coombs
  • Control de Coombs
  • Suero salino fisiológico
  • Muestra de sangre anticoagulada con EDTA con la que se prepara una suspensión de hematíes lavados al 3% en SSF

Técnica

  1. Rotular dos tubos por muestra con su número correspondiente y marcar uno con la letra D y otro como Control Negativo.
  2. Echar dos gotas de suero Anti-D en el tubo marcado con la letra D y dos gotas de control negativo en el marcado como CN.
  3. Añadir a cada tubo una gota de suspensión de hematíes de la muestra correspondiente y mezclar.
  4. Incubar a 37ºC durante 30 minutos.
  5. Centrifugar 2 minutos a 2000 rpm.
  6. Resuspender el botón celular y observar si existe aglutinación en alguno de los dos tubos. Si macroscópicamente no se aprecia aglutinación, se comprueba microscópicamente si existen agregados de hematíes.
  7. Lavar los hematíes tres veces con suero salino fisiológico, centrifugando 2 minutos a 2000 rpm. Decantar totalmente la solución salina, sobre todo en el último lavado.
  8. Añadir a cada tubo 2 gotas de antiglobulina humana (suero de Coombs) y mezclar con el botón celular.
  9. Centrifugar 2 minutos a 2000 rpm.
  10. Resuspender el botón celular y observar la posible presencia de aglutinación macroscópica y microscópicamente.
  11. Si no hay aglutinación en ninguno de los tubos se añade a cada tubo una gota de control de Coombs. Si la técnica se ha hecho bien tienen que aglutinar los dos tubos al echar el control de Coombs.

Resultado

Determinación del antígeno D débil (Du) en tubo
Incubando los tubos a 37ºC en el baño termostatado.
Determinación del antígeno D débil (Du) en tubo
Aglutinación en el fondo del tubo tras centrifugar después de poner en contacto la muestra con Anti-D.
Determinación del antígeno D débil (Du) en tubo
Muestra llevada a Coombs para comprobar la existencia del antígeno Du.

Interpretación de los resultados

Al aglutinar con el Anti-D los hematíes son RH positivo, por lo que no es necesario llevar a Coombs ya que los hematíes tienen el antígeno D en su superficie.

Observaciones

Por suerte uno de los grupos tenían en su mano una muestra RH negativo y pudimos seguir, y fotografiar, el proceso hasta el final. La muestra fue negativa para el Du y por tanto fue catalogada como RH negativo.

Deja un comentario

Uso de cookies

Este sitio web utiliza cookies para que usted tenga la mejor experiencia de usuario. Si continúa navegando está dando su consentimiento para la aceptación de las mencionadas cookies y la aceptación de nuestra política de cookies, pinche el enlace para mayor información.plugin cookies

ACEPTAR
Aviso de cookies