Determinación Cuantitativa de Urea

La Determinación cuantitativa de urea es una práctica que realicé en la asignatura de bioquímica clínica. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Determinación cuantitativa de urea

Objetivo

Determinar la concentración de urea de una muestra problema.

Fundamento

La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea presente en la muestra en amoniaco (NH4+) y anhídrido carbónico (CO2). Los iones amonio formados se incorporan al -cetoglutarato por acción de la glutamato deshidrogenasa (GLDH) con oxidación paralela de NADH a NAD+.

La disminución de la concentración de NADH en el medio es proporcional a la concentración de urea de la muestra ensayada.

Determinación cuantitativa de urea

La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se forma en el hígado a partir de su destrucción. La concentración de urea en sangre (uremia) aumenta como consecuencia de dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencia cardiaca, hemorragias gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales.

Material y reactivos

  • Cubetas de espectrofotómetro
  • Fotocolorímetro
  • Micropipetas
  • Puntas de micropipetas
  • Papel de filtro
  • Suero sanguíneo problema
  • Kit Urea de la casa comercial BSM
    • S: Patrón primario acuoso de Urea 50 mg/dL
    • R1 y R2: Reactivos de trabajo (tampón y enzimático)
    • R: 4 volumenes de R1 con un volumen de R2

Técnica

  1. Preparar tres cubetas de espectrofotómetro que se denominen Blanco, Patrón y Muestra.
  2. En el Blanco pipetear 1 ml de solución R.
  3. En el Patrón pipetear 1 ml de solución R y 10 μL de la sustancia patrón (S).
  4. Repetir el procedimiento con la Muestra, pipetear 1 ml de solución R y 10 μL del suero sanguíneo problema.
  5. Leer las absorbancias a los 30 segundos (A1) y a los 90 segundos (A2) a 340nm de longitud de onda.
  6. Calcular A = A2 – A1.

Resultado e interpretación

A los 30 segundos:

  • Absorbancia Muestra: 0,102
  • Absorbancia Patrón: 0,007

A los 90 segundos:

  • Absorbancia Muestra 0,091
  • Absorbancia Patrón 0,009

Se realiza el cálculo de la concentración haciendo uso de la fórmula incluída en el protocolo de la práctica. Fórmula idéntica a la expuesta en la práctica de la determinación cuantitativa de albúmina y otras prácticas similares que emplean kits de BSM:

Cuantificación de la glucosa

El resultado obtenido es de 275 mg/dl de urea.

Los valores de referencia son 15-45 mg/dl de Urea en suero o plasma. Los valores obtenidos están muy por encima de los valores normales, y esto puede deberse a un mal procesamiento de la muestra, una lectura errónea debido a la caducidad del kit o a la falta de mantenimiento del material de lectura.

Determinación cuantitativa de Urea
Reactivos de la práctica de la determinación cuantitativa de urea.

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