Determinación cuantitativa de proteínas totales

La Determinación cuantitativa de proteínas totales es una práctica que realicé en la asignatura de bioquímica clínica. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Determinación cuantitativa de proteínas totales

Objetivo

Realizar una determinación cuantitativa de proteínas totales presentes en una muestra problema.

Fundamento

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo. Actúan como elementos estructurales y de transporte. Se dividen en dos fracciones, albúmina y globulinas. Su determinación es útil en la detección de:

  • Hiperproteinemia producida por hemoconcentración, deshidratación o aumento en la concentración de proteínas especificas.
  • Hipoproteinemia por hemodilución debida a un defecto en la síntesis proteica, perdidas excesivas (hemorragias) o catabolismo proteico excesivo.

Determinación cuantitativa de proteínas totales

En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta azulado en presencia de las sales de cobre del reactivo de Biuret, que contiene, además, yoduro como antioxidante. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de proteínas totales en la muestra ensayada.

Material y reactivos

  • Cubetas de espectrofotómetro
  • Fotocolorímetro
  • Micropipetas
  • Puntas de micropipetas
  • Papel de filtro
  • Suero sanguíneo problema
  • Kit Proteínas totales de la casa comercial Spinreact
    • S: Patrón primario de Albúmina Bovina 7 g/dl
    • R: Reactivo de Biuret

Técnica

  1. Preparar tres cubetas de espectrofotómetro que se denominen Blanco, Patrón y Muestra.
  2. En el Blanco pipetear 1 ml de solución R.
  3. En el Patrón pipetear 1 ml de solución R y 25 μL de la sustancia patrón (S).
  4. Repetir el procedimiento con la Muestra, pipetear 1 ml de solución R y 25 μL del suero sanguíneo problema.
  5. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC o 10 min a temperatura ambiente (15-25ºC).
  6. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la Muestra, a 530-550 nm de longitud de onda, frente al Blanco del reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos, asi que hay que efectuar las lecturas durante ese periodo de tiempo.

Resultado e interpretación

  • Absorbancia del Patrón: 0.526
  • Absorbancia de la Muestra: 0.452

Se realiza el cálculo de la concentración de proteínas totales haciendo uso de la fórmula incluída en el protocolo de la práctica. Fórmula idéntica a la expuesta en la práctica de la cuantificación de la glucosa y de otras similares:

Cuantificación de la glucosa

El resultado obtenido es de 6,01 g/dl de proteínas totales.

Los valores de referencia son 6,6 – 8,3 g/dL, por tanto la muestra tiene un valor de proteínas totales debajo de los valores normales (Hipoproteinemia, ver fundamento de la práctica).

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