Determinación cuantitativa de fosfolípidos

La Determinación cuantitativa de fosfolípidos es una práctica que realicé en la asignatura de bioquímica clínica. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Determinación cuantitativa de fosfolípidos

Objetivo

Determinar la concentración de fosfolípidos de una muestra problema.

Fundamento

Los fosfolípidos son hidrolizados por la fosfolipasa D y la colina liberada es secuencialmente oxidada por la colina oxidasa (CHO) a betaína, con la simultanea producción de peróxido de hidrógeno. En presencia de peroxidasa (POD) el peróxido de hidrógeno acopla oxidativamente a la 4-Aminofenazona (4-AF) y al diclorofenol formando una quinonamina coloreada. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de fosfolípidos presentes en la muestra ensayada.

Determinación cuantitativa de fosfolípidos

Los fosfolípidos son un componente principal de las membranas celulares. La determinación cuantitativa de fosfolípidos en suero se utiliza en el diagnóstico y monitorización de alteraciones del hígado, fundamentalmente ictericias obstructivas.

Material y reactivos

  • Cubetas de espectrofotómetro
  • Fotocolorímetro
  • Micropipetas
  • Puntas de micropipetas
  • Papel de filtro
  • Suero sanguíneo problema
  • Kit fosfolípidos BSM
    • S: Patrón primario acuoso de fosfolípidos 300 mg/dl.
    • R1 y R2: Reactivos de trabajo
    • R: Reconstitución de R2 con 10mL de R1

Técnica

  1. Preparar tres cubetas de espectrofotómetro que se denominen Blanco, Patrón y Muestra.
  2. En el Blanco pipetear 1 ml de solución R y 10 μL de agua destilada.
  3. En el Patrón pipetear 1 ml de solución R y 10 μL de la sustancia patrón (S).
  4. Repetir el procedimiento con la Muestra, pipetear 1 ml de solución R y 10 μL del suero sanguíneo problema.
  5. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC.
  6. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la Muestra, a 480-520 nm de longitud de onda, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos, así que hay que efectuar las lecturas durante ese periodo de tiempo.

Resultado e interpretación

  • Absorbancia del Patrón: 0.715
  • Absorbancia de la Muestra: 0.207

Se realiza el cálculo de la determinación cuantitativa de fosfolípidos haciendo uso de la fórmula incluída en el protocolo de la práctica. Fórmula idéntica a la expuesta en la práctica de la cuantificación de la glucosa:

Cuantificación de la glucosa

El resultado obtenido es de 86,85 mg/dl de fosfolípidos.

Los valores de referencia están entre 125 y 275 mg/dl, por tanto la concentración de fosfolípidos de la muestra problema está por debajo de los valores normales.

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