Determinación cuantitativa de Fosfatasa Ácida

La Determinación cuantitativa de Fosfatasa Ácida es una práctica que realicé en la asignatura de bioquímica clínica. Durante el segundo año de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Determinación cuantitativa de fosfatasa ácida

Objetivo

Cuantificar la concentración de fosfatasa ácida de una muestra problema.

Fundamento

La fosfatasa ácida es una enzima que se encuentra presente en el bazo, hígado, riñón, próstata y otros elementos celulares. Su mayor interés clínico está en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades prostáticas y desórdenes hematológicos, entre otros.

Determinación cuantitativa de fosfatasa ácida

La fosfatasa ácida (FAC) cataliza la hidrólisis del α-naftil fostfato a pH ácido liberando α-naftol y fosfato. El α-naftol reacciona con una sal de diazonio (Fast Red TR) formando un cromógeno cuya velocidad de formación es proporcional a la concentración catalítica de fosfatasa ácida en la muestra problema.

Material y reactivos

  • Cubetas de espectrofotómetro
  • Fotocolorímetro
  • Micropipetas
  • Puntas de micropipetas
  • Papel de filtro
  • Suero sanguíneo problema
  • Kit Fosfatasa ácida de la casa comercial BSM
    • R1: Citrato sódico 100 mmol/L, pentanodiol 0,2 mol/L, pH 5,2
    • R2: α-naftil fostfato 10 mmol/L, Fast Red TR 6 mmol/L
    • R3: Tartrato sódico 2 mmol/L
    • R4: Ácido acético 500 mmol/L
    • R: Disolver 1 comprimido de R2 en un vial de R1 o en 5mL de R1 según el protocolo

Técnica

  1. Atemperar R y el fotocolorímetro/espectrofotómetro a 37 ± 0,1ºC.
  2. Pipetear en una cubeta termostatizada a 37 ± 0,1ºC.
    Determinación cuantitativa de fostasa ácida
  3. Mezclar e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente.
  4. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra a 405 nm, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
  5. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (∆A/min).

Resultado e interpretación

Las lecturas obtenidas fueron las siguientes:

Determinación cuantitativa de fosfatasa ácida

La determinación cuantitativa de fosfatasa ácida se realiza haciendo uso de las siguientes fórmulas:

  • ∆A/min x 844 = U/L de FAC
  • FAC Prostática = FAC Total – FAC No Prostática

No se realizaron los cálculos porque se compararon las lecturas con las de otros grupos de trabajo y eran desorbitadas. Al repasar la técnica nos dimos cuenta de un error (ver observaciones).

Determinación cuantitativa de fosfatasa ácida

Observaciones

Hubo un problema a la hora de reconstituir los reactivos, ya que había dos protocolos pertenecientes a dos lotes diferentes del mismo kit, pero con instrucciones distintas para la reconstitución del reactivo de trabajo.

El reactivo de trabajo no fue reconstituido de la manera correcta, ya que en nuestro caso se cruzaron los protocolos y los kits (diferentes lotes). Por tanto los resultados no fueron en absoluto fiables.

Es muy importante comprobar que los reactivos y las instrucciones pertenecen al mismo lote antes de proceder con la técnica.

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