Determinación cuantitativa de Aspartato Transaminasa (AST / GOT)

La Determinación cuantitativa de Aspartato Transaminasa (AST / GOT) es una práctica que realicé en la asignatura de bioquímica clínica. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Determinación cuantitativa de Aspartato Transaminasa (AST / GOT)

Objetivo

Cuantificar la concentración de Aspartato Transaminasa (AST / GOT) en una muestra problema.

Fundamento

La AST es una enzima intracelular. Se encuentra en niveles altos en el músculo del corazón, las células del hígado, las células del músculo esquelético y en menor cantidad en otros tejidos.

Aunque un nivel elevado de AST en suero no es específico de enfermedad hepática, se emplea principalmente para su diagnóstico y seguimiento junto con otras enzimas como la Alanina Transaminasa y ALP. También se utiliza en el control post-infarto, en pacientes con desórdenes del músculo esquelético y en otras afecciones.

Determinación cuantitativa de Aspartato Transaminasa (AST / GOT)

La Aspartato transaminasa, también denominada Aspartato aminotransferasa e inicialmente llamada transaminasa glutamato oxaloacética (GOT), cataliza la transferencia reversible de un grupo amino del aspartato al -cetoglutarato con formación de glutamato y oxalacetato. El oxalacetato producido es reducido a malato en presencia de malato deshidrogenasa (MDH) y NADH.

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio, determinada fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de AST en la muestra problema.

Material y reactivos

  • Cubetas de espectrofotómetro
  • Fotocolorímetro
  • Micropipetas
  • Puntas de micropipetas
  • Papel de filtro
  • Suero sanguíneo problema
  • Agua desionizada
  • Kit AST de la casa comercial Spinreact

Técnica

  1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o desionizada.
  2. Pipetear en una cubeta:
    Determinación cuantitativa de Alanina Transaminasa
  3. Mezclar e incubar 1 minuto a temperatura ambiente.
  4. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronómetro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
  5. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (∆A/min).

Resultado e interpretación

La lectura se realizó a 340 nm de longitud de onda. Las lecturas obtenidas fueron las siguientes:

  • Inicial: 0.011
  • Primer minuto: 0.004
  • Segundo minuto: -0.003
  • Tercer minuto: -0.011

Los valores obtenidos no tienen sentido y no permiten el cálculo de la AST, que se calcula de la misma forma que la ALT (multiplicando el incremento de absorbancia por 1750 U/L) y tiene unos valores de referencia que no superan los 31 U/L para mujeres y 38 U/L para hombres.

Observaciones

Las lecturas del fotocolorímetro fueron nefastas, con resultados negativos para casi todos los grupos. Estas lecturas pueden deberse a un mal procesamiento de la muestra, una mala medición o a la caducidad del kit.

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