La Determinación cuantitativa de albúmina es una práctica que realicé en la asignatura de bioquímica clínica. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.
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Título
Determinación cuantitativa de albúmina.
Objetivo
Determinar la concentración de albúmina de una muestra problema.
Fundamento
La albúmina se combina con el verde de bromocresol a pH ligeramente ácido, produciéndose un cambio de color proporcional a la concentración de albúmina presente en la muestra problema.
Determinación cuantitativa de albúmina
La albúmina es una de las proteínas plasmáticas más importantes producidas en el hígado. Las concentraciones plasmáticas de esta proteína se utilizan en el diagnóstico y tratamiento de numerosas enfermedades primarias que afectan al hígado y a los riñones.
Material y reactivos
- Cubetas de espectrofotómetro
- Fotocolorímetro
- Micropipetas
- Puntas de micropipetas
- Papel de filtro
- Suero sanguíneo problema
- Kit Albúmina BSM
- S: Patrón primario acuoso de albúmina 5 g/dL
- R: Reactivo de trabajo
Técnica
- Preparar tres cubetas de espectrofotómetro que se denominen Blanco, Patrón y Muestra.
- En el Blanco pipetear 1 ml de solución R.
- En el Patrón pipetear 1 ml de solución R y 5 μL de la sustancia patrón (S).
- Repetir el procedimiento con la Muestra, pipetear 1 ml de solución R y 5 μL del suero sanguíneo problema.
- Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (15-25ºC).
- Leer la absorbancia (A) del Patrón y la Muestra, a 610-660 nm de longitud de onda, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 60 minutos a temperatura ambiente, asi que hay que efectuar las lecturas durante ese periodo de tiempo.
Resultado e interpretación
- Absorbancia del Patrón: 0.959
- Absorbancia de la Muestra: 0.577
Se realiza el cálculo de la concentración haciendo uso de la fórmula incluída en el protocolo de la práctica. Fórmula idéntica a la expuesta en la práctica de la cuantificación de la glucosa:
El resultado obtenido es de 3.00 g/dl de albúmina.
Los valores de referencia son 3,5-5 g/dl, por tanto el valor obtenido es inferior a los valores de referencia.
Se han descrito interferencias en el método con valores de bilirrubina hasta 110 mg/l, hemoglobina hasta 1 g/l y lipemia hasta 10 g/l. Existen también varias drogas y otras sustancias que interfieren en la determinación analítica de la albúmina.
Observaciones
Al igual que ocurrió con las prácticas de la cuantificación de la glucosa y del lactato, resultó sorprendente el resultado que se obtuvo. Hasta entonces los fotocolorímetros no estaban funcionando bien debido a varios factores como su posible falta de mantenimiento, la reutilización contínua de las cubetas (suciedad difícil de eliminar y rayaduras) y la caducidad de los reactivos utilizados en las técnicas. Se esperaban resultados desproporcionados, muy por encima o muy por debajo de los valores de referencia.