Cuantificación del Lactato

La Cuantificación del lactato es una práctica que realicé en la asignatura de bioquímica clínica. Durante el segundo curso de mis estudios del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Título

Cuantificación del lactato.

Objetivo

Determinar la concentración de lactato presente en una muestra problema.

Fundamento

El lactato de la muestra es convertido en piruvato por acción de la lactato oxidasa (LO). En esta reacción se forma peróxido de hidrógeno, el cual reacciona con el 4-clorofenol y la aminoantipirina, en una reacción catalizada por la peroxidasa, formándose un cromóforo que se mide espectrofotométricamente.

Cuantificación del lactato

La medida de la concentración del ácido láctico es útil para el diagnostico y el tratamiento de la acidosis láctica. Esta anomalía puede dividirse en dos tipos, en una hay una pobre oxigenación tisular, y en el otro tipo no hay evidencias de hipoxia. Condiciones asociadas con una baja oxigenación tisular incluyen fallo congestivo cardiaco y anemia severa. Condiciones asociadas con el otro tipo incluyen diabetes mellitus, fallo renal o enfermedades hepáticas.

Material y reactivos

  • Cubetas de espectrofotómetro
  • Fotocolorímetro
  • Micropipetas
  • Puntas de micropipetas
  • Papel de filtro
  • Suero sanguíneo problema
  • Kit Lactato BSM
    • S: Patrón primario acuoso de Lactato 10 mg/dL.
    • R1 y R2: Reactivos de trabajo
    • R: Reconstitución de R2 con 10mL de R1

Técnica

  1. Preparar tres cubetas de espectrofotómetro que se denominen Blanco, Patrón y Muestra.
  2. En el Blanco pipetear 1 ml de solución R y 10 μL de agua destilada.
  3. En el Patrón pipetear 1 ml de solución R y 10 μL de la sustancia patrón (S).
  4. Repetir el procedimiento con la Muestra, pipetear 1 ml de solución R y 10 μL del suero sanguíneo problema.
  5. Mezclar e incubar 10 minutos a 37ºC o 30 min a temperatura ambiente (15-25ºC).
  6. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la Muestra, a 490-530 nm de longitud de onda, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos, asi que hay que efectuar las lecturas durante ese periodo de tiempo.

Resultado e interpretación

Los resultados fueron leídos a 500nm de longitud de onda:

  • Absorbancia del Patrón: 0.129
  • Absorbancia de la Muestra: 0.216

Se realiza el cálculo de la concentración de lactato haciendo uso de la fórmula incluída en el protocolo de la práctica. Fórmula idéntica a la expuesta en la práctica de la cuantificación de la glucosa:

Cuantificación de la glucosa

El resultado obtenido es de 16.74 mg/dl de lactato.

Los valores de referencia son 4.5-19.8 mg/dl de lactato, por tanto el valor obtenido está dentro de los límites normales.

Cuantificación del lactato
Reactivo de trabajo R1.
Cuantificación del lactato
Reactivo de trabajo R2.

Observaciones

Al igual que ocurrió con la práctica de la cuantificación de la glucosa, resultó sorprendente el buen resultado que se obtuvo en la práctica. Hasta entonces los fotocolorímetros no estaban funcionando bien debido a varios factores como su posible falta de mantenimiento, la reutilización contínua de las cubetas (suciedad difícil de eliminar y rayaduras) y la caducidad de los reactivos utilizados en otras técnicas.

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