Barrido de longitudes de onda

Barrido de longitudes de onda

El barrido de longitudes de onda fue una práctica que realicé en la asignatura de bioquímica. Durante el transcurso del segundo año del CFGS de Laboratorio de Diagnóstico Clínico.

Barrido de longitudes de onda

Título

Barrido de longitudes de onda

Objetivo

Realizar un barrido de longitudes de onda sobre una muestra problema.

Fundamento

Cuando se pretende determinar espectrofotométricamente la concentración de una sustancia problema en un medio líquido, es imprescindible conocer las longitudes de onda a las que esta sustancia es capaz de absorber energía de una forma considerable.

Esto se debe a que si se hace incidir, sobre la solución de la sustancia problema, un haz luminoso de una longitud de onda a la que esta sustancia casi no absorbe energía, los resultados de absorbancia medidos por el espectrofotómetro serán siempre muy bajos. Por tanto serán inútiles para el cálculo de la concentración de la sustancia.

Para descubrir la capacidad de absorción de energía de una sustancia a distintas longitudes de onda es preciso hacer un barrido de longitudes de onda. Esto consiste en elegir una única solución de la sustancia problema a una determinada concentración. Después se mide su absorbancia en el espectrofotómetro a distintas longitudes de onda.

Cada sustancia tiene una capacidad diferente de absorción de energía a las distintas longitudes de onda que constituyen el espectro lumínico.

Por lo tanto, si se hace una representación gráfica de los resultados obtenidos en el barrido de longitudes de onda, se obtiene una imagen característica que hará posible distinguir la sustancia porblema de otras sustancias. También permitirá descubrir la sustancia problema en una solución que contenga, en principio, la sustancia problema desconocida.

Barrido de longitudes de onda manual

El barrido de longitudes de onda puede hacerse de forma manual o de forma automática.

El método manual de barrido de longitudes de onda suele utilizarse haciendo uso de un espectrofotómetro de haz simple. Se lleva a cabo situando la solución de la sustancia investigada, previamente vertida en el interior de una cubeta de espectrofotómetro, en la celda de medida del aparato. A continuación se seleccionan las longitudes de onda que se van a utilizar y finalmente se realizan las medidas.

Material y reactivos

  • Agua destilada o desionizada.
  • Muestra de permanganato potásico (Farmaquímica Sur S.L. de 98.25% de riqueza, lote 626014023) a una concentración de 0.1 g/l.
  • Matraz aforado de 100 ml de capacidad.
  • Pipetas pasteur de plástico.
  • Dos cubetas de espectrofotómetro.
  • Espectrofotómetro.
  • Bolígrafo.
  • Hoja de papel milimetrado.
  • Balanza Jadever Sky-300.

Técnica

  1. Preparar la muestra de KMnO4.
  2. Verter un blanco, compuesto por agua destilada o agua desionizada, en una cubeta de espectrofotómetro.
  3. Depositar la muestra de permanganato potásico en otra cubeta de espectrofotómetro.
  4. Ajustar el espectrofotómetro, para que haga incidir sobre su celda de medida un haz de luz de 500 nm de longitud de onda.
  5. Situar la cubeta que contiene el blanco en el espectrofotómetro y efectuar la puesta a cero de la absorbancia.
  6. Retirar la cubeta del blanco del espectrofotómetro.
  7. Ubicar la cubeta que contiene la muestra en la celda de medida del espectrofómetro.
  8. Dar al espectrofotómetro las instrucciones pertinentes para que mida la absorbancia generada por la muestra.
  9. Anotar el resultado obtenido.
  10. Repetir los pasos anteriores, pero tras un ajuste previo y sucesivo del haz de luz del espectrofotómetro a las longitudes de onda de 505, 510, 515, 520, 525, 530, 535, 540, 545 y 550.
  11. Representar gráficamente los resultados obtenidos, consiguiendo de esta manera el barrido de longitudes de onda de la sustancia problema.

Cálculos

De cara al paso 1 de la técnica tenemos que calcular los gramos de permanganato que necesitamos para diluir la muestra.

Son 0.0102 gramos de KMnO4 comercial los que tomaremos del frasco y los que diluiremos en 100 ml de agua destilada o desionizada.

Resultados

Representamos los resultados obtenidos en una tabla. En ella relacionamos los valores de absorbancia obtenidos en cada medición, con su longitud de onda correspondiente.

Barrido de longitudes de onda

Una vez obtenida la tabla, extrapolamos los datos a una hoja de papel milimétrico. Si no tenemos una hoja de papel milimétrico siempre podemos hacer uso de alguna herramienta informática. En cualquier caso, el resultado de la gráfica sería el siguiente:

Gráfica de barrido de longitudes de onda

Interpretación de los resultados

Una vez representados todos los valores en una hoja de papel milimetrado (ver gráfica en la sección anterior de resultados) comprobamos que el pico de absorbancia está establecido en 550 nm.

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