Adsorción de anticuerpos con Polietilenglicol (PEG)

La Adsorción de anticuerpos con Polietilenglicol (PEG) es una técnica muy utilizada en el laboratorio de inmunohematología de banco de sangre. Permite una adsorción diferencial de anticuerpos que favorece su identificación en paneles de anticuerpos irregulares.

Esta técnica también recibe el nombre de microadsorción de anticuerpos con PEG.

Adsorción de anticuerpos con Polietilenglicol (PEG)

El polietilenglicol (PEG) es un polímero neutro, soluble en agua, que potencia las reacciones antigeno-anticuerpo. Actúa eliminando agua, produciendo una concentración del anticuerpo, aumentando su captación y, en muchos casos, aumentando la fuerza de la reacción. Se hace uso de PEG comercial y se utiliza complementariamente al Test de Coombs Indirecto.

El PEG también puede utilizarse tanto para detección e identificación de anticuerpos como para pruebas de compatibilidad pretransfusional. Pero su punto fuerte es su uso en la adsorción diferencial de anticuerpos

Ventajas y limitaciones de la técnica

El adsorbido con polietilenglicol cuenta con una serie de ventajas respecto a otras técnicas de adsorción diferencial. Una de ellas es el consumo de la muestra problema, que es menor. También es menor la cantidad necesaria de hematíes diana para la fijación de los anticuerpos a su membrana.

Otra ventaja es el tiempo necesario de incubación, que también es inferior, favoreciendo la realización de estudios más cortos. Esto repercute en la cantidad de trabajo pendiente en el laboratorio, evitando acumulaciones innecesarias y reduciendo la espera en la entrega de hemoderivados compatibles al paciente.

En cuanto a las limitaciones, los anticuerpos de clase IgM, especialmente los del Sistema ABO y Lewis, reaccionan menos, o no lo hacen, con PEG.

Adsorción diferencial de anticuerpos

En ocasiones un paciente puede aloinmunizarse con más de un anticuerpo. Al realizar un panel de identificación de anticuerpos irregulares es muy posible que, si existe la presencia de más de un anticuerpo, éstos puedan solaparse en la lectura del panel.

Un ejemplo muy claro es el estudio del anticuerpo Anti-G del Sistema RH. Para identificar correctamente la presencia, o ausencia, de Anti-D, Anti-C y Anti-G, es necesario recurrir a la adsorción diferencial.

Sistema RH
Estrategia de valoración de Anti-G ante un patrón Anti-D + Anti-C.

Lo mismo puede ocurrir ante la lectura de un panel de 11 células en el que positividades y negatividades de más de un anticuerpo coincidan. Para estudiar correctamente al paciente es necesario adsorber el anticuerpo que se visualice con mayor claridad, utilizando hematíes con el antígeno correspondiente. De este modo se obtiene un adsorbido sin el anticuerpo en cuestión, pudiendo enfrentarlo al panel de 11 células para identificar el anticuerpo que quedaba por debajo.

Material y reactivos necesarios

El material necesario para esta técnica es el siguiente:

  • Centrífuga
  • Pipetas pasteur
  • Tubos de centrífuga
  • Gradilla
  • Baño termostatado

Y los reactivos:

  • Polietilenglicol (PEG)
  • Muestra de sangre problema del paciente a estudiar (se utiliza plasma o suero salvo en autoadsorbidos que se utiliza todo)
  • Sangre con hematíes de fenotipo conocido
  • Suero salino fisiológico

Técnica

  1. Centrifugar la muestra a 3500 rpm durante 10 minutos, y separar el plasma trasvasándolo a otro tubo limpio.
  2. Lavar los hematíes fenotipados 3 veces con grandes cantidades de suero salino fisiológico, centrifugando a 3500 rpm durante 10 minutos tras cada lavado. Eliminar el sobrenadante del último lavado.
  3. Preparar dos tubos y agregar el mismo volumen de hematíes lavados a cada uno.
  4. En el primer tubo agregar a los hematíes el mismo volumen de plasma problema y de PEG (1 volumen de cada uno, 3 volúmenes en total).
  5. Mezclar e incubar a 37ºC durante 15 minutos.
  6. Centrifugar la mezcla 10 minutos a 3500 rpm. Recoger el sobrenadante (mezcla de plasma y PEG) y depositarlo en el segundo tubo.
  7. Homogeneizar el segundo tubo e incubarlo durante 15 minutos a 37ºC.
  8. Centrifugar durante 10 minutos a 3500 rpm, recoger el sobrenadante en un tubo aparte (mezcla de plasma y PEG, ya sin el anticuerpo adsorbido).
  9. Estudiar la mezcla de plasma y PEG enfrentándola a un panel de 11 células para identificación de anticuerpos irregulares.

Variaciones de la técnica

La técnica puede desarrollarse en tres pasos haciendo uso de un tercer tubo. La finalidad de este paso añadido es la de garantizar la total alo o autoadsorción del anticuerpo que queremos discriminar.

Los inconvenientes de añadir un paso más es un aumento tanto de la cantidad de hematíes diana necesarios como del tiempo requerido para realizar la técnica.

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